Identification and molecular function of novel acetylcholine receptor gene in plants

植物新型乙酰胆碱受体基因的鉴定及其分子功能

• 批准号: 22K05445
• 负责人: 山本 紘輔
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05445/
• 关键词: アセチルコリン; アセチルコリン受容体; 神経伝達物質; アセチルコリンエステラーゼ; 植物; 環境適応

RI標識したAChRリガンドである[125I]αブンガロトキシン([125I]αBgt)を用いて、リガンドに対して高い結合能を有する植物を選定した。結果として、レモンバーム根の細胞膜画分がリガンドに対して高い結合能を有していた。次に以下の方法で植物AChR様タンパク質の分離を試みた。方法1: 光親和性標識[125I] αブンガロトキシン(αBgt)を上記細胞膜画分と反応させ、光架橋した。光架橋した試料を電気泳動することでRI標識リガンドが結合したAChR様タンパク質をゲル上で検出した。その結果、約60kDaにバンドが検出された。同様な工程をRI標識していないαBgtを使用して行い、電気泳動後に上記AChR様タンパク質が検出された分子量(約60kDa)と同位置のゲルを回収した。方法2：レモンバーム根の細胞膜画分を界面活性剤で可溶化し、リガンド固定化アフィニティーカラムにより植物AChR候補タンパク質群を部分精製した。対照区としてリガンドが結合していないカラムにより試料を分離し、非特異吸着タンパク質群を得た。上記2試料を電気泳動に供試し、バンドパターンを比較することで、AChR候補タンパク質群に特異的なバンドを回収した。方法1と同様に、60kDa付近にAChR候補タンパク質群に特異的なバンドを検出することができた。

使用RI标记的AChR配体[125I]α银环蛇毒素([125I]αBgt)，选择与该配体具有高结合能力的植物。结果，香蜂草根的细胞膜部分对配体具有高结合能力。接下来，我们尝试使用以下方法分离植物 AChR 样蛋白。方法1：使光亲和标记的[ 125 I]α-银环蛇毒素(αBgt)与上述细胞膜级分反应并进行光交联。通过光交联样品的电泳在凝胶上检测到与 RI 标记的配体结合的 AChR 样蛋白。结果，在约60kDa处检测到条带。使用未用RI标记的αBgt进行类似的过程，并收集电泳后检测到上述AChR样蛋白的相同分子量（约60kDa）的凝胶。方法2：用表面活性剂溶解香蜂草根细胞膜部分，并使用配体固定的亲和柱部分纯化植物AChR候选蛋白。作为对照，使用未结合配体的柱分离样品以获得一组非特异性吸附的蛋白质。将上述两个样品进行电泳，通过比较条带图案，回收了AChR候选蛋白组特异的条带。与方法 1 类似，我们能够检测到 60 kDa 左右的 AChR 候选蛋白组特异条带。

项目成果

Aspergillus niger由来新奇コリンエステラーゼ遺伝子の同定と酵素特性

黑曲霉新型胆碱酯酶基因的鉴定和酶特性

• 发表时间: 2022
• 作者: 佐藤 淳;山本 紘輔
• 通讯作者: 山本 紘輔