Ｃｌａｕｄｉｎ－５　ｂｉｎｄｅｒによる薬物脳内移行性向上戦略の確立

使用 Claudin-5 粘合剂建立改善药物进入大脑的策略

基本信息

批准号：
15J10065
负责人：
橋本洋佑
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J10065/
关键词：
Claudin-5 抗体血液脳関門

项目摘要

本研究は、claudin-5 binderを用いて血液脳関門を制御し、薬物をより脳に送達させる戦略の確立を行うことを目的とする。本提案は、claudin binderを用いることで、claudinにより構成された細胞間隙密着機構であるtight junctionが可逆的に制御され、細胞間隙を介した薬物輸送を可能とする、という当研究室が明らかにしてきた知見に基づく。特にclaudin-5は、血液脳関門を構成する脳内血管内皮細胞で高発現しており、その欠失は特定の分子量以下の分子の透過を許容する血液脳関門を形成することが分かっている。本研究を遂行するためには、claudin-5の細胞外領域に特異的に結合するbinderの取得が必要不可欠である。本研究では、claudin-5を膜表面に有するプロテオリポソームを免疫することで、世界初となるclaudin-5特異的binderであるモノクローナル抗claudin-5抗体を複数クローン作製することに成功した。続いて、取得した抗体の中で最もヒトclaudin-5への結合親和性が高い2B12と名付けた抗体のバリア制御活性を、市販されている血液脳関門を模倣した培養系を用いて評価した。その結果、2B12を500 ug/mLの濃度で処置した場合、この模倣系の経内皮電気抵抗値を50%近く低下させることが分かった。本研究で得られた抗claudin-5抗体は、世界初のclaudin-5特異的binderであり、かつ、血液脳関門のバリアを緩める活性を持つことが分かった。今後は、本研究で得られた抗体及び抗体を用いて作製したclaudin-5 binderを用いて、claudin-5 binderによって血液脳関門の透過性を向上させ、脳内への薬物の移行量を向上させることが実際に動物モデルで可能であるかを評価して行く予定である。

本研究的目的是建立一种利用claudin-5粘合剂将药物输送到大脑来控制血脑屏障的策略。该提议基于我们实验室的研究结果，即通过使用紧密连接蛋白粘合剂，可以可逆地控制紧密连接（即由紧密连接蛋白形成的细胞间紧密连接），从而使药物能够通过细胞间隙运输。特别是，claudin-5在构成血脑屏障的脑血管内皮细胞中高表达，其缺失已被证明可形成血脑屏障，允许低于一定分子量的分子通过。为了进行这项研究，必须获得一种能够特异性结合claudin-5胞外区的结合剂。在这项研究中，我们通过在膜表面用 Claudin-5 免疫蛋白脂质体，成功克隆了多个单克隆抗 Claudin-5 抗体，这是世界上第一个 Claudin-5 特异性结合剂。接下来，使用模拟血脑屏障的市售培养系统评估了所获得的抗体中与人claudin-5具有最高结合亲和力的名为2B12的抗体的屏障调节活性。他们发现，用浓度为 500 ug/mL 的 2B12 处理可使该模拟系统的跨内皮电阻降低近 50%。本研究获得的抗claudin-5抗体是世界上第一个claudin-5特异性结合剂，并被发现具有松弛血脑屏障的活性。未来，我们将使用本研究中获得的抗体和使用该抗体生产的claudin-5粘合剂来改善claudin-5粘合剂的血脑屏障的通透性，并增加转移到大脑中的药物量。评估这在动物模型中是否真的可能。

项目成果

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专利数量（0）

Safety profile and anti-tumor activity of a new generated human/mouse cross-reactive anti-claudin-4 monoclonal antibody in mice

新型人/鼠交叉反应性抗claudin-4单克隆抗体在小鼠体内的安全性和抗肿瘤活性

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yosuke Hashimoto; Yumi Kawahigashi; Tomoyuki Hata; Xiangru Li; Kiyohito Yagi; Masuo Kondoh
通讯作者：
Masuo Kondoh

Roles of the first-generation claudin binder, Clostridium perfringens enterotoxin, in the diagnosis and claudin-targeted treatment of epithelium-derived cancers

第一代紧密蛋白结合剂产气荚膜梭菌肠毒素在上皮源性癌症的诊断和靶向治疗中的作用

DOI：
10.1007/s00424-016-1878-6
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
0
作者：
Y. Hashimoto; K. Yagi; M. Kondoh
通讯作者：
M. Kondoh

Claudin-targeted drug development using anti-claudin monoclonal antibodies to treat hepatitis and cancer

使用抗 Claudin 单克隆抗体开发 Claudin 靶向药物来治疗肝炎和癌症

DOI：
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
5.2
作者：
Y. Hashimoto; M. Fukasawa; H. Kuniyasu; K. Yagi; M. Kondoh
通讯作者：
M. Kondoh

Generation and characterization of a human-mouse chimeric antibody against the extracellular domain of claudin-1 for cancer therapy using a mouse model.

使用小鼠模型生成抗 Claudin-1 细胞外结构域的人-小鼠嵌合抗体并对其进行表征，用于癌症治疗。

DOI：
10.1016/j.bbrc.2016.06.025
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hashimoto Y; Tada M; Iida M; Nagase S; Hata T; Watari A; Okada Y; Doi T; Fukasawa M; Yagi K; Kondoh M.
通讯作者：
Kondoh M.

Current progress in a second-generation claudin binder, anti-claudin antibody, for clinical applications

第二代紧密蛋白结合剂抗紧密蛋白抗体临床应用的最新进展