神経系におけるガングリオシドとsrcファミリーチロシンキナーゼLynの結合

神经系统中神经节苷脂和 src 家族酪氨酸激酶 Lyn 的结合

• 批准号: 10134239
• 负责人: 笠原 浩二
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10134239/
• 关键词: ガングリオシド; スフィンゴ脂質; srcファミリーキナーゼ; ミクロドメイン; カベオラ

申請者は神経系におけるガングリオシドの機能の解明を目的として、抗ガングリオシド抗体で免疫沈降する際に共沈してくる蛋白質の同定を試みている。昨年度、抗ガングリオシドGD3抗体でsrcファミリーチロシンキナーゼLyn、カベオリンが共沈し、さらに小脳初代培養細胞表面上のGD3を抗GD3抗体でクロスリンクするとLynが活性化し80kDa蛋白質のチロシンリン酸化がおこることを報告した。今年度は、シグナル伝達におけるスフィンゴ糖脂質ミクロドメイン/カベオラの役割を解析する一環として、小脳初代培養細胞における非受容体型キナーゼLynと会合する受容体分子の検索を行なった。ラット小脳初代培養細胞を^<35>Sメチオニンで代謝標識し、抗GD3抗休で免疫沈降したところ分子量135kDaの蛋白質(p135)が共沈した。^<125>I表面標識されること、PI特異的ホスホリパーゼC処理で培地中へ切り出されることから、GPIアンカー型の膜蛋白質であることがわかった。抗体による再免疫沈降の実験からp135はイムノグロブリンスーパーファミリーに属し神経突起伸長活性を持つ神経細胞接着分子TAG-1であることがわかった。次に小脳初代培養細胞のTAG-1を抗TAG-1抗体でクロズリンクしたところLynが活性化し80kDa蛋白質のチロシンリン酸化がおこった。さらにTAG-1およびLynはショ糖密度勾配遠心でスフィンゴ糖脂質ミクロドメイン/カベオラ画分に回収された。以上の結果は、TAG-1の接着シグナルがスフィンゴ糖脂質ミクロドメイン/カベオラにおいてLynを介して細胞内へ伝達されることを示している。

申请人正试图鉴定与抗神经节苷脂抗体免疫沉淀时共沉淀的蛋白质，目的是阐明神经节苷脂在神经系统中的功能。去年，我们发现src家族酪氨酸激酶Lyn和caveolin与抗神经节苷脂GD3抗体共沉淀，而且当原代培养的小脑细胞表面的GD3与抗GD3抗体交联时， Lyn 被激活，80kDa 蛋白发生酪氨酸磷酸化。今年，作为我们分析鞘糖脂微结构域/小凹在信号转导中的作用的一部分，我们在原代培养的小脑细胞中寻找与非受体激酶 Lyn 相关的受体分子。当原代培养的大鼠小脑细胞用35S甲硫氨酸代谢标记并用抗GD3免疫沉淀时，共沉淀出分子量为135kDa的蛋白质(p135)。发现它是GPI锚定膜蛋白，因为它用^ 125 I进行表面标记，并且通过用PI特异性磷脂酶C处理将其切除到培养基中。抗体再免疫沉淀实验表明p135是TAG-1，一种神经元细胞粘附分子，属于免疫球蛋白超家族，具有神经突生长活性。接下来，当原代培养的小脑细胞中的TAG-1与抗TAG-1抗体交联时，Lyn被激活，并且发生80kDa蛋白的酪氨酸磷酸化。此外，通过蔗糖密度梯度离心，在鞘糖脂微区/小凹部分中回收了 TAG-1 和 Lyn。这些结果表明 TAG-1 粘附信号通过鞘糖脂微域/小窝中的 Lyn 传递到细胞中。

项目成果

Ishii,A et al.: "Expression cloning and functional characterization of human cDNA for ganglioside GM3 synthase" J.Biol.Chem.273. 31652-31655 (1998)

Ishii,A 等人：“神经节苷脂 GM3 合酶的人 cDNA 的表达克隆和功能表征”J.Biol.Chem.273。

笠原浩二ら: "スフィンゴ糖脂質ミクロドメイン/カベオラとシグナル伝達" 蛋白質・核酸・酵素. 43(16). 2522-2530 (1998)

Koji Kasahara 等人：“糖鞘脂微结构域/小凹和信号转导”蛋白质/核酸/酶 43(16) (1998)。