srcファミリーチロシンキナーゼによるシグナル伝達におけるスフィンゴ糖脂質の役割

鞘糖脂在 src 家族酪氨酸激酶信号转导中的作用

• 批准号: 10780376
• 负责人: 笠原 浩二
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780376/
• 关键词: ガングリオシド; スフィンゴ脂質; srcファミリーキナーゼ; ミクロドメイン; カベオラ; ラフト

シアル酸を含むスフィンゴ糖脂質であるガングリオシドは脳神経系に多く存在し、神経発生に何らかの役割を果たしていると考えられている。そこで、ガングリオシドが神経発生に関わる分子と会合していることを想定し、ラット脳から抗ガングリオシドGD3抗体で免疫沈降する際に共沈してくるタンパク質の同定を試みた。そして昨年度までに、ラット小脳においてガングリオシドGD3がGPIアンカー型神経細胞接着分子TAG-1、srcファミリーキナーゼLynと会合していることを報告してきた。ラット小脳初代培養細胞を抗TAG-1抗体でクロスリンク、またはTAG-1リガンドであるホスファカン(神経特異的プロテオグリカン)により刺激すると、Lynが活性化し80kDaタンパクのチロシンリン酸化がおこった。さらに抗ガングリオシドGD3抗体でクロスリンクしても、同じ反応がおこった。これらのことは、GPIアンカータンパク質のシグナル伝達にスフィンゴ糖脂質が関与していることを示唆している。TAG-1、Lynはショ糖密度勾配遠心でラフト画分に検出された。興味深いことに、細胞表面のスフィンゴ糖脂質の糖鎖をエンドグリコセラミダーゼ処理で特異的に除いてやると、TAG-1クロスリンクによるLynの活性化および80kDaタンパクのチロシンリン酸化がおこらなくなった。以上の結果は、TAG-1の接着シグナルがラフトを介して細胞内のLynへ伝達されること、さらにそのシグナル伝達にはスフィンゴ糖脂質糖鎖が重要な役割を果たしていることを示している。

神经节苷脂是含有唾液酸的鞘糖脂，在大脑神经系统中含量丰富，被认为在神经发生中发挥一定作用。因此，假设神经节苷脂与参与神经发生的分子相关，我们尝试鉴定用抗神经节苷脂 GD3 抗体从大鼠脑中免疫沉淀时共沉淀的蛋白质。直到去年，我们报道神经节苷脂 GD3 与大鼠小脑中 GPI 锚定的神经元粘附分子 TAG-1 和 src 家族激酶 Lyn 相关。当原代培养的大鼠小脑细胞与抗 TAG-1 抗体交联或用 TAG-1 配体磷酸聚糖（神经元特异性蛋白聚糖）刺激时，Lyn 被激活，80kDa 蛋白发生酪氨酸磷酸化。与抗神经节苷脂GD3抗体进一步交联引起相同的反应。这些发现表明鞘糖脂参与 GPI 锚定蛋白信号转导。通过蔗糖密度梯度离心在筏部分中检测到 TAG-1 和 Lyn。有趣的是，当细胞表面的鞘糖脂的糖链被神经酰胺内切酶处理特异性去除时，由于TAG-1交联导致的Lyn激活和80kDa蛋白的酪氨酸磷酸化被消除。这些结果表明TAG-1粘附信号通过筏传递至细胞内的Lyn，并且鞘糖脂糖链在该信号传递中发挥重要作用。

项目成果

笠原浩二: "バイオマニュアルUPシリーズ分子生物学研究のための培養細胞実験法" 羊土社, (1999)

Koji Kasahara：“分子生物学研究的生物手册 UP 系列培养细胞实验方法”Yodosha，（1999）

Kasahara, K. et al.: "Functional roles of glycosphingolipids in signal transdriction ria lipid rafts"Glycoconjugate J.. (印刷中).

Kasahara, K. 等人：“鞘糖脂在脂筏信号转导中的功能作用”Glycoconjugate J.（出版中）。

Kasahara, K. et al.: "Possible roles of glycosphingolipids in lipid rafts"Biophys. Chem.. 82(2/3). 121-127 (1999)

Kasahara, K. 等人：“鞘糖脂在脂筏中的可能作用”Biophys。

笠原浩二: "バイオマニュアルUPシリーズ分子生物学研究のための培養細胞実験法"羊土社. 9 (1999)

Koji Kasahara：“分子生物学研究的生物手册 UP 系列培养细胞实验方法”Yodosha 9 (1999)。

笠原浩二ら: "スフィンゴ糖脂質ミクロドメイン/カベオラとシグナル伝達" 蛋白質・核酸・酵素. 43(16). 2522-2530 (1998)

Koji Kasahara 等人：“糖鞘脂微结构域/小凹和信号转导”蛋白质/核酸/酶 43(16) (1998)。