リジン脱メチル化酵素ＫＤＭ７Ａによるｐ５３活性化機構の解明

赖氨酸脱甲基酶 KDM7A 阐明 p53 激活机制

基本信息

批准号：
24770165
负责人：
米沢理人
金额：
$ 3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

平成24年度実績に記述したMCF-7細胞内におけるp53-KDM7Aの相互作用は、GE社製Donkey anti-rabbit IgG-HRP を用いて行なった結果によるものであったが、この抗体は免疫沈降に用いたanti-p53 及び anti-KDM7A (いずれも mouse IgG) にcross-reactしてしまっており、また、丁度その分子量がp53の分子量に近いことから来る解釈の誤りであることが分かった。そこで、慎重にmouse IgGにcross-reactしないことが確認されたCST社製 goat anti-rabbit IgG-HRPで同様の実験を行なったところ、内在性p53-KDM7Aの相互作用は確認できなかった。細胞内においてごくminor fractionのp53がKDM7Aと相互作用する可能性も残されたので、FLAG-KDM7Aを導入したHEK293F細胞を抗FLAG M2ゲルで精製後、FLAGペプチドで溶出し、抗p53抗体でブロットしたところ、FLAG-KDM7Aを導入していない細胞に比べ優位に、また再現性をもってp53が溶出された。以上から、細胞内においてもp53とKDM7Aが直接相互作用することが確認された。

2012 年结果中描述的 MCF-7 细胞中的 p53-KDM7A 相互作用是基于使用 GE 的 Donkey 抗兔 IgG-HRP 获得的结果，但该抗体未用于抗 p53 和抗 KDM7A（均为小鼠）。 IgG）使用还发现这种误解是由于其分子量与p53接近所致。因此，当我们使用 CST 的山羊抗兔 IgG-HRP（已被仔细确认不会与小鼠 IgG 发生交叉反应）进行类似实验时，未证实内源性 p53-KDM7A 相互作用。由于仍有极小部分的p53与细胞内的KDM7A相互作用的可能性，因此使用抗FLAG M2凝胶纯化用FLAG-KDM7A转染的HEK293F细胞，用FLAG肽洗脱，并用抗p53抗体印迹。，与未转染 FLAG-KDM7A 的细胞相比，p53 的洗脱具有优越性和重现性。由上可知，p53和KDM7A在细胞内也直接相互作用。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification of a Selective Inhibitor of KDM2/7 Histone Lysine Demethylases and its Antiproliferative Activity.

KDM2/7 组蛋白赖氨酸脱甲基酶选择性抑制剂的鉴定及其抗增殖活性。

DOI：
10.1021/jm400624b
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
7.3
作者：
Suzuki T; Ozasa H; Itoh Y; Zhan P; Sawada H; Mino K; Walport L; Ohkubo R; Kawamura A; Yonezawa M; Tsukada Y; Tumber A; Nakagawa H; Hasegawa M; Sasaki R; Mizukami T; Schofield CJ; Miyata N
通讯作者：
Miyata N

Regulation of p53 activity by the lysine demethylase KDM7A

赖氨酸脱甲基酶 KDM7A 对 p53 活性的调节