ピロリ菌のホスホリパーゼ〜胃潰瘍・胃癌発症のニュートリガー〜

幽门螺杆菌磷脂酶〜胃溃疡/胃癌的新触发因素〜

基本信息

批准号：
09877437
负责人：
杉山政則
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者は、これまで食物の消化酵素として考えられてきた、膵臓でつくられる膵ホスホリパーゼA_2(hPLA_2)が、膵癌細胞の増殖を促進することをごく最近発見したことから、「胃に棲息するピロリ菌(Helicobacter pylori)が、もしも、ホスホリパーゼA_2を産生しているならば、本酵素が胃潰瘍や胃癌の要因となるかも知れない」という作業仮説を立てた。そこで、本研究では、胃組織検体から分離したピロリ菌のホスホリパーゼA_2活性を調べると共に、本酵素遺伝子のクローニングを目的とした。平成9年度の研究により、ピロリ菌のいくつかの株はホスホリパーゼA_2を産生することを確認したが、その生産量はごく微量であった。そこで、平成10年度は、大腸菌のホスト・ベクター系を用いてピロリ菌の染色体ライブラリーを作製することにした。具体的には、ピロリ菌の染色体DNAをHindIIIで消化後、pUC18に挿入し、Escherichia coli DH5αに導入した。その結果、1500個の形質転換体からなる染色体ライブラリーが作製できた、このライブラリーから任意に10クローンを選び、それぞれプラスミドを分離後、ゲノムの挿入の有無を調査した。その結果、10クローンすべてが0.5〜2.0kbの間でH.pylori染色体DNAのインサーションを持つことを確認した。そこで、これらのクローンがホスホリパーゼA_2活性を発現しているか否か、レシチンの加水分解活性を測定することによりアッセイした。その結果、No.36と命名したクローンが本酵素を産生することを見い出した。今後は、このクローンの有するDNAインサートの塩基配列を解析する。さらに、ホスホリパーゼA_2遺伝子を強力プロモーターの支配下に置くことにより、本酵素の大量産生系を確立すると共に、得られた酵素を用いて胃癌や胃潰瘍との関連性を調査する。

主要研究人员最近发现，胰腺中产生的胰腺磷脂酶 A_2 (hPLA_2) 被认为是一种食物消化酶，可以促进胰腺癌细胞的增殖。我们假设，如果幽门螺杆菌产生磷脂酶 A_2，则这会促进胰腺癌细胞的增殖。酶可能是胃溃疡和胃癌的一个因素。因此，在本研究中，我们旨在研究从胃组织样本中分离的幽门螺杆菌的磷脂酶A_2活性，并克隆该酶的基因。 1997年的研究证实，幽门螺杆菌的某些菌株能产生磷脂酶A_2，但产生的量极少。因此，1998年，我们决定利用大肠杆菌宿主载体系统创建幽门螺杆菌染色体文库。具体而言，用HindIII消化幽门螺杆菌染色体DNA，将其插入pUC18中，并导入大肠杆菌DH5α中。结果，构建了由1,500个转化体组成的染色体文库，从该文库中任意选择10个克隆，并在从每个克隆中分离质粒后，研究基因组插入的存在或不存在。结果，证实所有10个克隆都具有0.5至2.0kb之间的幽门螺杆菌染色体DNA插入。因此，我们通过测定卵磷脂水解活性来测定这些克隆是否表达磷脂酶A_2活性。结果发现，一个名为No.36的克隆产生了这种酶。将来，我们将分析该克隆中包含的DNA插入片段的核苷酸序列。此外，通过将磷脂酶A_2基因置于强启动子的控制下，我们将建立大规模生产该酶的系统，并利用获得的酶来研究与胃癌和胃溃疡的关系。