新しい二次元電気泳動ゲル解析法による胃癌,大腸癌に関与する未知なる遺伝子の解明

使用新的二维电泳凝胶分析方法阐明与胃癌和结直肠癌相关的未知基因

基本信息

批准号：
09877249
负责人：
板野理
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

現在、胃癌に先行して、大腸癌の臨床検体を用いた研究を継続中である。大腸癌新鮮手術切除検体25例の癌部、非癌部のゲノムDNAを抽出し、RLGS法を用いて、各々のprofileを作成した。(板野、斎藤)二次元電気泳動により得られた各profile上でのスポットの変化を、癌部と非癌部間で比較したところ、いくつかの共通スポット変化をみとめた。その内訳は、非癌部のみに出現するスポットが4種、癌部のみに出現するスポットが2種であった。最も高頻度にみられたスポット変化は癌部のみに出現するスポットで、25例中19例(76%)にみとめた。そのDNA断片をゲルからクローニングするために、制限醇素Not I siteのみを描出するtrapper methodを用いた。クローニングはtrapper施行後のprofileから、目的とするスポットを直接打抜き、DNAを抽出した。DNA量の確保のため、プラスミドに押入し、大腸菌を用いて形質転換を行い、増幅させた。さらにダイデオキシ法にて、塩基配列を決定した。今回のクローニングで得られたDNA断片の塩基配列は、ヒト脂肪酸合成酵素遺伝子(FAS)と69%の相同性を認めるものであった。(板野)今後は,得られたDNA断片をprobeとし、該当する癌関連遺伝子の同定を試みる予定である。以上の手法にて、他の変化スポットも1種ずつクローニングしてゆくことで、未知の癌関連遺伝子同定が進んでゆくと考える。また、各profile間のスポット変化と臨床病理学的特徴を解析することで、特定の遺伝子変化に対応した病態が解明される可能性がある。

我们目前正在使用结肠癌（先于胃癌）的临床标本进行研究。从 25 个手术切除的新鲜结肠癌标本的癌性和非癌性区域中提取基因组 DNA，并使用 RLGS 方法创建每个样本的图谱。（Itano，Saito）当我们比较癌性区域和非癌性区域之间通过二维电泳获得的每个轮廓上的斑点变化时，我们发现了一些共同的斑点变化。细分为，4种斑点只出现在非癌部位，2种斑点只出现在癌部位。最常观察到的斑点变化是仅出现在癌变区域的斑点，在 25 例中有 19 例（76%）中观察到了这种变化。为了从凝胶中克隆 DNA 片段，我们使用了 trapper 方法，该方法仅显示限制性位点 Not I。对于克隆，在应用捕获剂后，通过直接从轮廓上打孔所需的点来提取 DNA。为了确保DNA的量，将其插入质粒中，使用大肠杆菌进行转化并扩增。此外，使用双脱氧法确定碱基序列。通过该克隆获得的DNA片段的碱基序列与人脂肪酸合酶基因(FAS)有69％的同源性。（板野）未来，我们计划利用获得的DNA片段作为探针，尝试鉴定相关的癌症相关基因。通过使用上述方法一一克隆其他变化点，我们相信未知癌症相关基因的鉴定将会取得进展。此外，通过分析每个图谱之间的斑点变化和临床病理特征，可以阐明与特定基因变化相对应的病理状况。