松果体実質性腫瘍の新しい腫瘍マーカーの開発

松果体实质肿瘤新肿瘤标志物的开发

• 批准号: 09877266
• 负责人: 田中 隆一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877266/
• 关键词: HIOMT; 松果体実質細胞性腫瘍; 腫瘍マーカー; Hydroxyindole-O-methyltransferase; 松果体実質性腫瘍

これまでに我々は,メラトニン合成酵素の一つで,正常組織では松果体と網膜に特異的に発現しているHIOMT(Hydroxyindole-O-methyltransferase)が松果体実質細胞性腫瘍において高頻度に発現していることを,mRNAレベルで確認し,同蛋白の腫瘍マーカーとしての有用性を強調してきた。今回の萌芽的研究では,HIOMTの発現を蛋白質レベルで検索すべく抗ヒトHIOMT抗体の作製を試みている。平成9年度は,松果体実質細胞性腫瘍におけるHIOMTの発現の有無を,症例を追加してin situhybridization法により検索し,ほとんどの症例においてHIOMT mRNAが発現していることを確認した。さらに,ヒト網膜芽細胞腫細胞株であるY79cellsより抽出したtotal RNAからHIOMT cDNAの全長を合成・精製し,このHIOMT cDNAを発現ベクターに導入し,glutathione-S-transrerase(GST)/HIOMT融合蛋白を作製した。平成10年度に行った研究内容と結果を以下に示す。1. 抗ヒトHIOMT抗体を得るための抗原を作製すべくGST/HIOMT融合蛋白の精製を試みたが,大腸菌からの抽出段階で可溶化が得られなかった。融合蛋白が合成された後にinclusion bodiesが形成されることがその原因と考え,種々の変性剤を使用してその可溶化を試みたが,最終的に水溶性分画に融合蛋白を溶出させることはできなかった。2. 次に,HIOMT cDNAの中で,より親水性の強いアミノ酸を多くコードしている部分を部分的に合成し,昨年度と同様の方法でGST/HIOMT融合蛋白を作製し精製を試みたが,結果は同様であった。3. 現在,HIOMT cDNAの全長,或いは一部をもとに,N末端にhistidine tagを付加した蛋白を合成し,ニッケルカラムで抽出する方法を用いて,抗原の精製を試みているところである。

我们之前报道过HIOMT（羟基吲哚-O-甲基转移酶）是一种在正常组织的松果体和视网膜中特异表达的褪黑激素合酶，在松果体实质肿瘤中也经常表达，我们已经证实该蛋白在mRNA上表达。水平并强调了这种蛋白质作为肿瘤标志物的有用性。在这项探索性研究中，我们试图创建一种抗人 HIOMT 抗体，以研究 HIOMT 在蛋白质水平上的表达。 1997年，我们通过额外病例和原位杂交研究了松果体实质肿瘤中是否存在HIOMT表达，并证实在大多数病例中表达HIOMT mRNA。此外，我们从人视网膜母细胞瘤细胞系Y79细胞中提取的总RNA合成并纯化了全长HIOMT cDNA，并将该HIOMT cDNA导入表达载体中以产生谷胱甘肽-S-反式酶（GST）/HIOMT融合蛋白。被创建。 1998年进行的研究的详细内容和结果如下所示。 1.尝试纯化GST/HIOMT融合蛋白以制备用于获得抗人HIOMT抗体的抗原，但在从大肠杆菌中提取步骤中无法获得溶解。我们认为其原因是融合蛋白合成后形成了包涵体，并尝试使用各种变性剂将其溶解，但最终无法将融合蛋白洗脱到水溶性级分中。我不能。 2. 接下来，我们部分合成了编码更多亲水性氨基酸的HIOMT cDNA，并尝试使用与去年相同的方法创建和纯化GST/HIOMT融合蛋白，结果相似。 3. 我们目前正在尝试根据HIOMT cDNA全长或部分合成N末端带有组氨酸标签的蛋白质并用镍柱提取来纯化抗原。

项目成果

Tsumanuma I,Tanaka R et al.: "Expression of hydroxyindole-O-methyltransferase(HIOMT)mRNA in pineal parenchymal tumors" Brain Pathology. 7. 1090- (1997)

Tsumanuma I、Tanaka R 等人：“松果体实质肿瘤中羟基吲哚-O-甲基转移酶 (HIOMT) mRNA 的表达”脑病理学。