頭頸部扁平上皮癌の神経周囲浸潤：ゲノム編集を用いた腫瘍生物学的解析

头颈鳞状细胞癌的神经周围浸润：使用基因组编辑进行肿瘤生物学分析

基本信息

批准号：
22K09934
负责人：
倉田俊一
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09934/
关键词：
頭頸部扁平上皮癌 p63 浸潤神経神経周囲浸潤 TP63

项目摘要

令和４年度(2022年度)は頭頸部扁平上皮癌由来細胞株からゲノム編集によって作ったp63ノックアウト細胞に関して、遺伝子発現の解析を行うとともに、マトリゲルフィルターによる神経周囲浸潤(PNI)のアッセイ系の構築に向けて実験を進めた。成果を以下に要約する。(1) ゲノム編集細胞としてはすでに中咽頭扁平上皮癌由来FaDu細胞株からCRISPR-Cas9法で構築したTP63遺伝子のノックアウト細胞株で、TP63発現全体が停止することが確認されたので、本研究でPNI活性を親細胞と比較する実験に用いることとした。(2) 遺伝子発現のマイクロアレイ解析を行ったところ、ノックアウト細胞は上皮間葉転換（EMT）を示す明確な変化を示した。加えて NEFL, NCAM1、NRCAM、NEUROD2、SEMA3D/4G/5Bほか神経発生と関連する遺伝子発現の大幅な上昇が検出された。その一部についてRT-qPCRとウエスタンブロットで確認を進めた。(3) 神経周辺浸潤（PNI）活性のアッセイ系を構築するために、まず一般的な浸潤アッセイとしてMatrigelチャンバーを用いて、血清を誘因剤として下層に移動する細胞を測定した。浸潤効率はノックアウト細胞で親細胞の2倍に上昇していた。癌組織は不均一な細胞集団であるが、TP63発現が低下してEMTを示す細胞は集団的な浸潤を先導することが最近報告され、その観察と一致している。さらに誘因細胞としてシュワン細胞に由来する細胞株を用いる浸潤アッセイの条件を検討した。

在第四年（FY2022），分析了由从头部和颈部和细胞癌中衍生的细胞编辑产生的p63基因组细胞，并构建了Matrigel滤波器构建（PNI）实验。结果总结下面。（1）作为一个基因组编辑单元，已经确认将在TP63基因敲除细胞库存中停止整个TP63的表达式，这是由CRISPR-Cas9方法从Tiharyngnic Papolaicocytical库存中构建的。比较母细胞。（2）基因表达的微软件分析表明，基因敲除细胞显示上皮叶转换（EMT）的明显变化。此外，检测到与NEFL，NCAM1，NCAM1，NRCAM，NEUROD2，SEMA3D/4G/5B以及与神经产生相关的其他基因表达相关的基因表达显着增加。我们为其中一些人进行了RT-QPCR和Western Blot。（3）为了构建神经周围具有侵袭（PNI）活性的测定系统，将下层移至下层的细胞作为一般浸润测定法被用作一般浸润测定法。影响效率是敲除单元的两倍。癌组织是一个不均匀的细胞组，但最近据报道，表明EMT的细胞由TP63表达的降低引起，观察结果与观察结果一致。此外，研究了使用源自雪旺细胞作为诱导细胞的细胞库存的侵袭测定条件。