Elucidation of renal spontaneous immune tolerance focusing on plasmacytoid dendritic cells - therapeutic strategies for induction of human renal immune tolerance

以浆细胞样树突状细胞为中心阐明肾自发免疫耐受——诱导人肾免疫耐受的治疗策略

• 批准号: 22K09514
• 负责人: 篠田 和伸
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09514/
• 关键词: 免疫寛容; 制御性形質細胞様樹状細胞; siglec-H; 腎移植; 腎自発免疫寛容; 形質細胞様樹状細胞; Siglec-H; 制御性T細胞

本研究は、マウス腎移植モデルにおいて、免疫抑制剤無しでアロ抗原に対する免疫寛容が成立する「腎自発免疫寛容」のメカニズムを解明することを目的としている。先行研究で、制御性形質細胞様樹状細胞（制御性pDC）がアロ腎移植モデルにおいて腎自発免疫寛容成立のために重要であることが示唆されたが、特にそのマーカーの一つであるsiglec-Hに着目し研究計画を立案した。本年度はpDC特異的にジフテキアトキシンレセプター（DTR）を組み込んだ遺伝子改変マウス（Siglech-DTR）を繁殖する予定でいた。このマウスにジフテリアトキシンを投与することでpDC(Siglec-H陽性細胞)を特異的に消去することが可能であり、腎自発免疫寛容のメカニズムにおけるpDCの役割をより詳細に評価することができる。本年度は繁殖室の調整に時間がかかり、Siglech-DTRマウスを実験有効数まで繁殖させるまでには至らなかった。実験進捗状況としては、マウス腎移植モデルをIsogfraftを用いて多数の腎移植を行い、一定の確率での成功率が得られた。次年度、siglech-DTRの繁殖が順調にすすめばすぐにでも実験にとりかかれる準備は整っている。また、免疫応答評価のため混合リンパ球試験（MLR）を行う予定でいるが、これに関してはResponder細胞をCFSE染色して、4-6日目の免疫応答後の分裂細胞割合をFlowcytometryで評価を行った。Stimulatorとしてビーズ（CD3, CD28）とアロ細胞を用いて比較を行ったが、MLRにより同等の細胞分裂反応を検出することができ、in vitroのCFSE-MLRの系はほぼ確立できたと考えている。

本研究的目的是阐明“肾脏自发免疫耐受”的机制，即在小鼠肾移植模型中无需免疫抑制剂即可建立对同种异体抗原的免疫耐受。先前的研究表明，调节性浆细胞样树突状细胞（调节性pDC）对于异体肾移植模型中肾脏自发免疫耐受的建立非常重要，特别是其标志物之一siglec，并制定了一项针对H的研究计划。今年，我们计划培育出具有 pDC 特异性白喉毒素受体 (DTR) 的转基因小鼠 (Siglech-DTR)。通过给这些小鼠注射白喉毒素，可以特异性消除pDC（Siglec-H阳性细胞），并且可以更详细地评估pDC在肾脏自发免疫耐受机制中的作用。今年，我们花了一些时间调整饲养室，未能培育出足够多的Siglech-DTR小鼠来有效进行实验。从实验进展来看，利用Isograft在小鼠肾移植模型中进行了大量的肾移植，并获得了一定的成功率。如果明年siglech-DTR的选育进展顺利，我们将尽快准备开始实验。我们还计划进行混合淋巴细胞测试（MLR）来评估免疫反应，为此我们将用CFSE对反应细胞进行染色，并使用流式细胞术评估第4-6天免疫反应后分裂细胞的比例。去了。使用珠子（CD3、CD28）和同种细胞作为刺激剂进行比较，我们能够使用MLR检测等效的细胞分裂反应，我们相信我们已经基本建立了体外CFSE-MLR系统。