Novel regenerative therapy for liver failure with skeletal myoblast cell sheet transplantation

骨骼肌成肌细胞片移植治疗肝衰竭的新型再生疗法

基本信息

批准号：
22K08800
负责人：
富丸慶人
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08800/
关键词：
肝不全筋芽細胞シート再生医療

项目摘要

まず，動物モデルにおける筋芽細胞シート移植の肝再生能の評価を行うべく，C57/BL6Jマウスを用いた非代償性肝硬変および肝切除後の肝不全モデルを作成し，このモデルに精製した筋芽細胞シートを移植し，肝再生能を評価した．筋芽細胞シートの作成は，本学において心不全改善効果を立証し，臨床応用しているものと同様に行った．非代償性肝硬変モデルはチオアセトアミド投与にて作成し，大量肝切除後の肝不全モデルはマウスに肝切除を行うことで作成した．これらのモデルにおいて，筋芽細胞シート移植による肝臓の線維化抑制効果を組織学的検討（H&E染色，Sirius-red染色，Masson Trichrome染色）にて確認した．また筋芽細胞シートを移植したマウスの肝細胞では，細胞増殖のマーカーであるKi67の発現が有意に亢進していた．さらに，筋芽細胞シートを移植したマウスにて，線維化に関連するマーカー（Acta2，Col1α1）の発現レベルが抑制されていることを確認した．また，血液検査では，移植後5週の時点で，筋芽細胞シート群の方がアルブミンが高値であり，AST，ビリルビンが有意に低値であることを確認した．さらに，肝臓の外側葉と中葉を切除する70%肝切除モデルでは筋芽細胞シートを移植したマウスにおいて，切除2日後に残肝重量の有意な増加を認め，さらにKi67陽性細胞率の増加および増殖シグナルの亢進が示された．さらに90%肝切除モデルを用いた検討も行った，このモデルでは，コントロール群では1日を超える生存は認められなかったが，それに対して筋芽細胞シート移植群では約半数で1日以上の生存が確認され、有意な肝切除後の生存期間の延長を認めた．これらの結果は，筋芽細胞シート貼付の肝線維化抑制による肝再生効果能を示唆するものであった．これらの結果を受けて，現在，筋芽細胞シートの効果の作用機序の解明を目指す実験の準備中である．

首先，为了评价成肌细胞片移植在动物模型中的肝再生能力，我们使用C57/BL6J小鼠建立肝切除后失代偿性肝硬化和肝衰竭模型，并在该模型中移植纯化的成肌细胞片。并评价肝再生能力。成肌细胞片的制作方法与我们大学已被证明可有效改善心力衰竭并应用于临床的成肌细胞片相同。通过给予硫代乙酰胺建立失代偿性肝硬化模型，并通过对小鼠进行肝切除术建立大规模肝切除术后的肝功能衰竭模型。在这些模型中，通过组织学检查（H&E染色、天狼星红染色、Masson Trichrome染色）证实了成肌细胞片移植对肝纤维化的抑制作用。此外，移植成肌细胞片的小鼠肝细胞中细胞增殖标志物 Ki67 的表达显着增加。此外，我们证实移植成肌细胞片的小鼠中纤维化相关标志物（Acta2、Col1α1）的表达水平受到抑制。此外，血液检查证实移植后5周时，成肌细胞片组的白蛋白较高，而成肌细胞片组的AST和胆红素显着较低。此外，在切除肝脏侧叶和中叶的 70% 肝切除模型中，移植成肌细胞的小鼠在切除后 2 天表现出残余肝脏重量显着增加，Ki67- 百分比也增加显示阳性细胞和增殖信号。我们还使用90%肝切除模型进行了调查，在该模型中，对照组没有观察到存活超过1天的情况，而成肌细胞片移植组中约有一半存活了超过1天。，肝切除术后生存期显着延长。这些结果表明，成肌细胞片的应用通过抑制肝纤维化而具有肝再生作用。基于这些结果，我们目前正在准备旨在阐明成肌细胞片作用机制的实验。