Fabrication of bioengineered sphincter construct with myoblast sheet

用成肌细胞片构建生物工程括约肌结构

• 批准号: 20K09012
• 负责人: 金高 賢悟
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09012/
• 关键词: 再生医療; 筋芽細胞; 括約筋; 細胞シート; 消化管再生

現在医師主導治験を進めている細胞シートのさらなる進化として生体材料である利点を生かした生理学的な機能の付加が期待される。加齢や疾病に伴う括約筋機能の低下は消化管において逆流性食道炎、便失禁など、尿路系においては排尿障害など種々の病態を引き起こし生命危機には直結しないものの生活の質の著しい低下を来す。これらの改善のために括約筋の再生医療を目的として薬剤に反応して収縮を行う細胞シートcontractile cell sheetの作成に着眼した。また次のステップとして細胞シートを輪状に立体配置して環状構造を形成することで収縮能を持つ環状収縮帯の再生を計画している。今年度は以下の研究を予定していたが、コロナ禍のため、他施設による実験内容の相談などが十分に行えなかった。日本再生医療学会など関連学会などに可能な限り参加をし、情報収集を行うことが出来た。実験に用いる確立されたマウス筋芽細胞株C2C12を入手、管腔構造作成のscaffoldとして用いるための小腸脱細胞化骨格作成なおの準備を進めているものの、現時点において実施出来ていない状況である。１．ラットの大腿筋組織もしくは確立された筋芽細胞を分離調整し、筋細胞への分化誘導を行う。筋細胞への分化はtotal RNAを抽出し逆転写酵素を用いたqRT-PCRを行うことで確認する。２．収縮能の獲得に重要な筋繊維の走行をそろえるべく、コラゲン膜コーティング培地にてconfluentな状態にて伸展刺激を加え刑事的に細胞形質変化を観察する。形質変化に伴って筋芽細胞、筋管細胞、筋繊維のマーカーであるMyoD、Mogenin遺伝子の発現をRT-PCRにて確認する。３．温度応答性培養皿上にて筋芽細胞を筋繊維の走行がそろった状況で培養し収縮能を有する筋細胞シートの作成を行う

预计会增加利用生物材料的生理功能，这是当前正在接受医师主导的临床试验的细胞表的进一步演变。与衰老和疾病相关的括约肌功能的减少是生命危机的恶化，这会导致各种病理状况，例如反流性食管炎和消化道中的粪便失禁，并且与生命危机无关。为了进行这些改进，我们专注于创建细胞片细胞板细胞片，该细胞表细胞片响应于再生医学的药物再生医学收缩。下一步计划重新生成一个受控函数，该功能通过将细胞板放在环形的三维布置中来形成圆形结构，具有控制能力。今年，计划了以下研究，但由于Corona的邪恶，无法与其他设施进行协商。我们能够尽可能地参与并收集相关社会的信息，例如日本再生医学学会。获得了用于实验的已建立的小鼠肌肉吐出细胞量C2C12，并为小肠细胞破细胞的骨架做准备，以用作腔体结构的支架，但目前尚未实施。 1。大鼠大腿肌肉组织或已建立的肌肉芽细胞分离并调整以诱导分化为肌肉细胞。通过提取总RNA并使用反向转移酶进行QRT-PCR来确认对肌肉细胞的确认。 2。为了完成肌肉纤维的驾驶，对于获得收缩很重要，在汇合状态下进行Corarae膜涂料培养基，并观察到细胞学变化。 RT-PCR证实随着特征的变化，肌肉芽，肌肉管细胞和肌肉纤维标记的表达和肌蛋白基因的表达。 3。在肌肉纤维运行的情况下，通过在温度反应培养板上培养肌肉芽细胞来创建具有收缩能力的肌肉细胞表。