肺炎球菌による急性肺障害におけるロイコトリエン受容体の役割

白三烯受体在肺炎球菌引起的急性肺损伤中的作用

• 批准号: 18F18093
• 负责人: 横溝 岳彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18F18093/
• 关键词: ロイコトリエンB4第二受容体; PLY 肺炎球菌毒素; ペプチドロイコトリエン受容体1; 上皮細胞障害; ペプチドロイコトリエン産生細胞; PLY; BLT2; ロイコトリエン

肺炎球菌感染による個体死亡は、菌が産生する毒素ニューモライシン(PLY)によると考えられているが、詳細は不明である。受入研究者は、生理活性脂質受容体BLT2の欠損マウスがPLYに対して感受性が高く、重篤な急性肺傷害を生じて早期に死に至ることに着目した。PLY投与によって肺胞内に気管支収縮物質ロイコトリエン(LTs)が蓄積したことから、BLT2欠損マウスではLTsに対する感受性が亢進していることが示唆された。BLT2欠損マウスでは、血管内皮細胞におけるLTs受容体CysLT1の発現が高く、CysLT1の拮抗薬の前投与により、PLY毒素依存的な個体死が70%程度レスキューされた。しかし、30%程度は個体死を回避できないことから、LTsの作用以外で死に至る可能性が示唆され、以下の解析を行った。1)BLT2を過剰発現する肺胞上皮細胞を樹立した。LDHの放出・PIによる核染色・細胞の形態変化を指標にPLYに対する感受性を調べたところ、BLT2過剰発現がPLYによる細胞障害を抑制することを見いだした。また、野性型およびBLT2欠損マウスより皮膚表皮角化細胞を単離・培養し、PLYに対する感受性を調べたところ、BLT2欠損細胞ではPLYによる細胞障害が著しく上昇していた。2)マスト細胞を欠損するKitW-shマウスにPLYを気道内投与して、肺胞洗浄液に含まれるLTC4,D4,E4の量をLC-MS/MSにて測定した。KitW-shマウスは、野性型マウスと同等量のLTsを産生したことから、PLY依存性のLTs産生はマスト細胞以外の細胞が行っていることが明らかとなった。3)CysLT1とBLT2を共に発現する細胞を樹立した。BLT2阻害剤の添加により、CysLT1の発現が上昇し、LTD4依存的なERKリン酸化が亢進したことから、BLT2はCysLT1受容体シグナルを抑制していることを見いだした。

据信肺炎球菌感染的个体死亡是由于细菌产生的毒素肺炎（PLY）造成的，但细节尚不清楚。寄主研究人员指出，缺乏生物活性脂质受体BLT2的小鼠对PLY高度敏感，从而导致严重的急性肺损伤和早期死亡。支气管收缩白细胞（LTS）在肺泡施用时的积累表明BLT2缺陷型小鼠更容易受到LT的影响。在BLT2缺陷型小鼠中，LTS受体Cyslt1在血管内皮细胞中的表达很高，并且Cyslt1的拮抗剂预先给予cyslt1的拮抗剂挽救了伴有毒素依赖的个体死亡。但是，由于大约30％的个体无法避免死亡，因此表明死亡可能会发生在LT的影响之外，并且进行了以下分析。 1）建立了过表达BLT2的肺泡上皮细胞。当我们使用LDH释放研究对PLY的敏感性时，PI的核染色和细胞形态变化为指标，我们发现BLT2过表达抑制了由PLY引起的细胞损伤。此外，当分离出皮肤表皮角质形成细胞的表皮角质形成细胞并从野生型和BLT2缺陷型小鼠中培养时，对它们的敏感性对PLY进行了检查，并发现在BLT2缺乏的细胞中，由PLY引起的细胞损伤显着增加。 2）在气道中施用了缺乏肥大细胞的KitW-SH小鼠，并使用LC-MS/MS测量了肺泡灌洗液中包含的LTC4，D4和E4的量。 KITW-SH小鼠产生的LT与野生型小鼠相同，并且发现依赖性LTS的LTS产生是由肥大细胞以外的其他细胞进行的。 3）建立了同时表达Cyslt1和blt2的细胞。添加BLT2抑制剂会增加Cyslt1的表达，并增加LTD4依赖性ERK磷酸化，从而导致BLT2抑制Cyslt1受体信号。

项目成果

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