核外移行機序を標的とした新規インフルエンザ薬の同定

针对核输出机制的新型流感药物的鉴定

• 批准号: 15F15416
• 负责人: 間 陽子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-10-09 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15F15416/
• 关键词: Influenza A virus; Influenza B virus; NP; CRM1; nuclear export; smoll molecule; エイズウイルス; Rev; nucleoprotein (NP); NXT1; inhibitor

表面抗原と異なり変異が起こりにくいインフルエンザウイルスの核内蛋白質Nucleoprotein（NP）の核外移行シグナルと核外移行宿主因子CRM1との結合を阻害することで検査した全てのインフルエンザAおよびB分離株のウイルス複製を阻害するDP2392-E10化合物を取得した。さらに、東大創薬機構からデータベースに登録されているDP2392-E10の構造類縁体5化合物の提供を受け、そのうち10mMで入手可能であった4化合物についてプラーク法によるインフルエンザウイルス複製阻害能の測定を行った。その結果、1化合物は複製阻害能が認められた(IC50=27.26M）。複製阻害能を示した化合物はDP2392-E10と同様のピラゾール様骨格を持つのに対し、阻害能を示さなかった化合物はいずれもピラゾール様骨格が2-ピラゾリン様骨格となっており、それにより3次元構造が変化し、活性を失ったと考えられた。また、DP2392-E10のベンゼン環パラ位のニトロ基をフッ素に置換した構造を持つ化合物がDP2392-E10と比べ、弱い複製阻害能を示したことから、構造関連相関による構造最適化およびリード化合物の創製が可能であることが示された。さらにDP2392-E10は宿主因子のCRM-1に結合し、ウイルスタンパク質の核外移行を阻害することから、すべての亜型のインフルエンザに加え、CRM-1依存的ウイルス複製を行うウイルスに対しても効果を示すことが考えられた。ヒト免疫不全ウイルス１型(HIV-1)のRevタンパク質はCRM-1依存的核外輸送によりウイルス複製に関与することから、DP2392-E10によるHIV-1複製阻害能についてp24-ELISA法による検討を行った。その結果、DP2392-E10はHIV-1複製阻害能を示すことが明らかになった。

我们获得了DP2392-E10化合物，该化合物抑制了通过抑制流感病毒核蛋白核蛋白（NP）核外转移信号的结合测试的所有流感和B分离株的病毒复制，这不太可能突变，核外托管宿主因子Crm1。此外，东京大学的药物发现机构提供了五个DP2392-E10的结构类似物，这些结构类似物已在数据库中注册，其中四种以10 mm的速度可用，并且可以通过斑块方法测量抑制流感病毒复制的能力。结果，发现一种化合物具有复制抑制能力（IC50 =27.26m）。表现出复制抑制能力的化合物具有与DP2392-E10相同的类似吡唑样骨架，而所有未表现出抑制性能力的化合物都具有2-吡唑啉类骨架的吡唑样骨干，从而改变了3D结构并失去了活性。此外，由于具有一种结构的化合物，在该化合物中，DP2392-E10的苯环PARA位置的硝基组被氟取代，表现出比DP2392-E10抑制复制的能力较弱，因此已经表明，通过结构优先级别的较大层面可以实现铅化合物的结构优化和创建。此外，DP2392-E10与宿主因子CRM-1结合并抑制病毒蛋白的核渗出，因此，除了在所有流感亚型的亚型外，还被认为对执行CRM-1依赖性病毒复制的病毒有效。由于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的REV蛋白通过CRM-1依赖性核输出参与病毒复制，因此通过P24-ELISA方法研究了DP2392-E10抑制HIV-1复制的能力。结果表明，DP2392-E10具有抑制HIV-1复制的能力。

项目成果

Inhibition of CRM1-mediated nuclear export of influenza A nucleoprotein and nuclear export protein as a novel target for antiviral drug development.

• DOI: 10.1016/j.virol.2017.04.001
• 发表时间: 2017-07
• 期刊: Virology
• 影响因子: 3.7
• 作者: Chutiwitoonchai N;Mano T;Kakisaka M;Sato H;Kondoh Y;Osada H;Kotani O;Yokoyama M;Sato H;Aida Y
• 通讯作者: Aida Y

Small Molecules Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type-I(HIV-I) Viral Replication by Targeting Gag-Tsg101 Interaction

通过靶向 Gag-Tsg101 相互作用小分子抑制人类免疫缺陷病毒 I 型 (HIV-I) 病毒复制

• 发表时间: 2015
• 作者: Siarot Lowela;佐藤洋隆;Chutiwitoonchai Nopporn;児玉栄一;黒田和道;武
• 通讯作者: 武

NXT1, a Novel Influenza A NP Binding Protein, Promotes the Nuclear Export of NP via a CRM1-Dependent Pathway.

• DOI: 10.3390/v8080209
• 发表时间: 2016-07-28
• 期刊: Viruses
• 作者: Chutiwitoonchai N;Aida Y
• 通讯作者: Aida Y

HIV-1 Vpr Abrogates the Effect of TSG101 Overexpression to Support Virus Release.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0163100
• 发表时间: 2016
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Chutiwitoonchai N;Siarot L;Takeda E;Shioda T;Ueda M;Aida Y
• 通讯作者: Aida Y

NXT1, a new identified NP binding partner that promotes nuclear export of influenza A viral protein and ribonucleoprotein

NXT1，一种新鉴定的 NP 结合伴侣，可促进甲型流感病毒蛋白和核糖核蛋白的核输出

• 发表时间: 2015
• 作者: Nopporn Chutiwitoonchai;間陽子
• 通讯作者: 間陽子