Quality assurance of human sperm in assisted reproductive technology

辅助生殖技术中人类精子的质量保证

• 批准号: 19591914
• 负责人: KANEKO Satoru
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19591914/
• 关键词: 精子; DNA; 2重鎖切断; 低酸素培養; テロメア; ICSI; フローサイトメトリ; 染色体; 片側開裂

1. 従来の直交電極をswitchしてDNA超伸展を図る方法に代え、ターンテーブルを装備した電気泳動装置を開発した。サーボ制御により、ターンテーブルが首振り運動することにより、効率よくDNA fiberの伸張が行えるようになった。2. 細胞操作過程における酸素傷害を防止するため、低酸素で細胞操作、細胞培養装置を開発し,酸素濃度2.0%環境下で高精度細胞培養が行えるようになった。3. フローサイトメトリ(FCM)を用いて精子DNA量を評価した。射精精子のDNA量は大きくばらついていたが、精製によりDNA量がそろった精子が得られることが示された。4. ペプチド核酸プローブを用いるFISH法により、染色体末端、すなわちテロメア部位の高精度観察を行った。半数体である精子は理論上46のシグナルが得られる。射精精子のシグナル数はばらついており、FCMにおけるDNA量のバラツキは項目3の結果を支持した。5. 分離、調製した精子は一部を用いて機能評価(品質管理)を行うことが不可欠である。検査時間確保のためにも凍結保存が必要であり、受精能維持可能な凍結保存法を開発した。

1.我们开发了一种配备转盘的电泳装置，而不是传统的切换正交电极来实现DNA超拉伸的方法。利用伺服控制，转盘摆动，从而可以有效拉伸 DNA 纤维。 2.为了防止细胞操作过程中的氧气损伤，我们开发了低氧细胞操作和细胞培养装置，可以在氧气浓度为2.0%的环境下进行高精度细胞培养。 3.使用流式细胞术(FCM)评估精子DNA含量。尽管射精精子中的 DNA 含量差异很大，但纯化后的精子具有均匀的 DNA 含量。 4.通过使用肽核酸探针的FISH方法对染色体末端即端粒位点进行高精度观察。理论上，单倍体精子可以获得46个信号。射精精子中的信号数量有所不同，FCM 中 DNA 量的变化支持第 3 项中的结果。 5. 必须使用分离和制备的精子的一部分进行功能评价（质量控制）。为了确保测试时间，冷冻保存是必要的，因此我们开发了一种保持生育能力的冷冻保存方法。

项目成果

HPLC for no stress screening of potential prostate cancer marker catechol estrogens in urine using a diamond electrode-electrochemical and fluorescence detector

使用金刚石电极电化学和荧光检测器对尿液中潜在的前列腺癌标志物儿茶酚雌激素进行 HPLC 无应力筛查

• 发表时间: 2007
• 作者: Katayama M; Takamatsu K; Kaneko S; Miyaji K; Ishikawa H; Matsuda Y
• 通讯作者: Matsuda Y

Individual tissue culture system in a disposable capsule with hypoxic atmosphere

一次性胶囊中的个体组织培养系统，具有低氧气氛

• 发表时间: 2008
• 作者: Kaneko S; Takamatsu K; Yoshida J; Miyaji K; Ishikawa H; Kawamata T; Shinozaki N
• 通讯作者: Shinozaki N

凍結保護剤とともに融解後等張化保護剤を使用する精子凍結保存システム

使用解冻后等渗保护剂和冷冻保护剂的精子冷冻保存系统

• 发表时间: 2008
• 作者: 原唯純; 兼子智; 高松潔; 佐藤博久; 吉村泰典
• 通讯作者: 吉村泰典

HPLC for no stress screening of potential prostate cancer marker catechol estrogens in urine using a diamond electrode-electrochemical and fluorescence detector.

使用金刚石电极电化学和荧光检测器对尿液中潜在的前列腺癌标志物儿茶酚雌激素进行 HPLC 无应力筛查。

• 发表时间: 2007
• 作者: Katayama M; Takamatsu K; Kaneko S; Miyaji K; Ishikawa H; Matsuda Y
• 通讯作者: Matsuda Y

ヒトへの組織移植を前提とした臨床培養に用いる使い捨て低酸素培養システムの構築

以组织移植为前提的临床培养用一次性缺氧培养系统的构建

• 发表时间: 2007
• 作者: 兼子智;宮地系典;中川博之;佐藤健二;小川真里子;石川光也;吉田丈児;黒田優佳子;小塙清;岡崎雅子;丸茂健;石川博通;高松潔
• 通讯作者: 高松潔