胆汁酸応答分子の分子内及び分子間活性化制御機構と生理代謝調節

胆汁酸响应分子的分子内和分子间激活控制机制及生理代谢调节

• 批准号: 07F07197
• 负责人: 槇島 誠
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07197/
• 关键词: 核内受容体; ビタミンD受容体(VDR); レチノイド受容体(RXR); 蛍光蛋白質; 蛍光共鳴エネルギー転移(FRET); 胆汁酸; コリプレッサー; コアクチベータ; ビタミンD受容体; レチノイド受容体; 蛍光共鳴エネルギー移転; 転写因子

胆汁酸応答性核内受容体のリガンド依存性転写活性化に伴う構造変化解析を、蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)を用いて行った。1)2分子FRET実験系の構築の為、AmCyan,ZsYellow,ECFP,EYFPの4種類の蛍光たんぱく質を用いてFRETペアの検討を行い、AmCyan/EYFPの新たな2分子FRETペアを見出した。2)AmCyan-VDRとEYFP-RXRをHEK293細胞に共発現させ、3種類のビタミンDアナログ(1,25-(OH)2D3,LCA,ADTT)によるヘテロダイマー形成能を比較検討した結果、合成ビタミンDアナログであるADTTは、添加30分においてVDR/RXRのヘテロダイマー形成を引き起こさないことがわかった。3)リガンド非存在下で、AmCyan-VDRはコリプレッサーであるEYFP-SMRTと強く結合し、リガンド添加でこれらのVDR/SMRTの結合は素早く解離される結果が得られた。SMRTのVDRからの解離において、ビタミンDアナログの構造的な違いによる違いは見られなかった。4)リガンド非存在下で、AmCyan-VDRはコアクチベータであるEYFP-SRC1と弱く結合し、1,25-(OH)2D3,合成ビタミンDアナログADTTによってこれらVDR/SRC1の結合は増加されたが次2次胆汁酸であるLCAによるVDR/SRC1の相互作用は処理30分においてその増加がほとんど見られなかった。

使用荧光共振能量转移（FRET）分析与胆汁酸响应核受体的配体依赖性转录激活相关的结构变化。 1）为了构建双分子FRET实验体系，我们使用AmCyan、ZsYellow、ECFP和EYFP四种荧光蛋白研究了FRET对，并发现了新的双分子FRET对AmCyan/EYFP。 2) 在 HEK293 细胞中共表达 AmCyan-VDR 和 EYFP-RXR，并比较与三种维生素 D 类似物（1,25-(OH)2D3、LCA、ADTT）形成异二聚体的能力，我们发现结果发现，合成维生素 ADTT（一种 D 类似物）在添加 30 分钟后不会引起 VDR/RXR 异二聚体形成。 3) 在没有配体的情况下，AmCyan-VDR 与辅阻遏物 EYFP-SMRT 强烈结合，并且在添加配体后，这些 VDR/SMRT 键很快解离。由于维生素 D 类似物的结构差异，未观察到 SMRT 与 VDR 的解离存在差异。 4) 在没有配体的情况下，AmCyan-VDR 与共激活剂 EYFP-SRC1 微弱结合，而这些 VDR/SRC1 结合在合成维生素 D 类似物 ADTT 1,25-(OH)2D3 的作用下几乎没有增加。治疗 30 分钟后，VDR/SRC1 与 LCA（一种次级胆汁酸）相互作用。

项目成果

Induction of SREBP-1c mRNA by differentiation and LXR ligand in human keratinocytes.

在人角质形成细胞中通过分化和 LXR 配体诱导 SREBP-1c mRNA。

• DOI: 10.1038/jid.2009.15
• 发表时间: 2009-06-01
• 期刊: The Journal of investigative dermatology
• 作者: Ai Yokoyama;M. Makishima;Mihwa Choi;Yoshitake Cho;S. Nishida;Y. Hashimoto;T. Terui
• 通讯作者: T. Terui

Therapeutic applications for novel non-hypercalcemic vitamin D receptor ligands

新型非高钙血症维生素 D 受体配体的治疗应用

• 发表时间: 2009
• 作者: Choi M

The Basic Helix-Loop-Helix Proteins Differentiated Embryo Chondrocyte (DEC) 1 and DEC2 Function as Corepressors of Retinoid X Receptors

基本螺旋-环-螺旋蛋白分化胚胎软骨细胞 (DEC) 1 和 DEC2 作为类视黄醇 X 受体的辅阻遏物发挥作用

• DOI: 10.1124/mol.109.057000
• 发表时间: 2009-12-01
• 期刊: Molecular Pharmacology
• 影响因子: 3.6
• 作者: Yoshitake Cho;M. Noshiro;Mihwa Choi;Kentaro Morita;T. Kawamoto;K. Fujimoto;Y. Kato;M. Makishima
• 通讯作者: M. Makishima