核内受容体の新規non－genomic機構の解明と創薬への応用

阐明核受体的新型非基因组机制及其在药物发现中的应用

• 批准号: 10J00300
• 负责人: 伊藤 一明
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J00300/
• 关键词: ビタミンD受容体; 腎臓線維化; 化合物スクリーニング; Vitamin D受容体(VDR); Smad

申請者はリガンドが豊富に存在するビタミンD受容体(VDR)を用いて、VDRのgenomic活性とnon-genomic活性を測定したところ、種々のリガンドごとに両活性が相関しないことを見い出している。このことは、VDRを含む核内受容体のgenomic/non-genomic経路が特定のリガンドで分離できることを示している。核内受容体のgenomic機構(転写活性化機構)とnon-genomic機構(TGF-βシグナル抑制機構)を別々に制御できるリガンドを用いることで、これまで明らかになっていないnon-genomic機構の分子メカニズムを解明することができる。また、新たなタイプの治療薬の開発につながると考えられる。前年度までに、VDRによるTGF-βシグナル抑制機構の分子基盤を明らかにすることができた。さらに、VDRのgenomic活性を持たず、non-genomic活性を持つ化合物を得るために、VDRの候補化合物ライブラリースクリーニングを実施し、数種のヒット化合物を得ることができた。同時にマウスを用いた腎臓線維化抑制効果の評価系を確立し、動物レベルの評価を行う準備も完了した。本年度ではその評価系を用いて、得られたVDRの化合物のin vivoにおける腎臓線維化に対する効果を調べた。5週齢雄マウスの片側腎臓尿管を結紮し、化合物を連日投与(60μg/kg/day)後、腎臓組織の切片を作製し、マッソントリクローム染色を行い、顕微鏡下で線維化レベルを組織学的に解析した。その結果、活性型ビタミンD3投与群と同様に化合物投与群でも確かに線維化レベルは低下していた。腎臓における線維化関連遺伝子のmRNA量とタンパク質量を測定したところ、PAI-1、I型コラーゲン、α-smooth muscle actinの発現量と蓄積量も低下していた。一方で血中のカルシウムイオン濃度を測定したところ、活性型ビタミンD3投与群では上昇しるのに対し、化合物投与群ではほぼ上昇していなかった。以上の結果より、VDRのgenomic活性を持たず、non-genomic活性を持つ化合物を同定し、その化合物が高カルシウム血漿を誘導することなく腎臓の線維化を抑制することを確認することができた。

申请人测量了具有丰富配体的维生素D受体(VDR)的基因组和非基因组活性，发现对于各种配体，这两种活性彼此不相关。这表明包括VDR在内的核受体的基因组/非基因组途径可以被特定配体分开。通过使用可以分别控制核受体的基因组机制（转录激活机制）和非基因组机制（TGF-β信号抑制机制）的配体，我们可以发现迄今为止尚未阐明的非基因组机制的分子其机制可以阐明。人们还相信这将导致新型治疗药物的开发。到前一年，我们已经阐明了VDR抑制TGF-β信号机制的分子基础。此外，为了获得不具有VDR基因组活性但具有非基因组活性的化合物，我们对VDR候选化合物进行了文库筛选，并获得了几种命中化合物。同时，我们建立了小鼠肾纤维化抑制效果评价体系，并完成了动物水平评价的准备工作。今年，我们利用这个评价体系，研究了获得的VDR化合物对体内肾纤维化的影响。结扎5周龄雄性小鼠的单侧肾输尿管，每日给予化合物(60μg/kg/天)后，制备肾组织切片，用Masson三色染色，并在下检查纤维化水平。显微镜进行科学分析。结果，在化合物施用组和活性维生素D3施用组中，纤维化水平确实降低。当我们测量肾脏中纤维化相关基因的mRNA和蛋白水平时，我们发现PAI-1、I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达和积累水平也降低。另一方面，当测量血钙离子浓度时，活性维生素D3组的血钙离子浓度增加，但化合物施用组的血钙离子浓度没有增加。基于上述结果，我们能够鉴定出不具有VDR基因组活性但具有非基因组活性的化合物，并证实该化合物抑制肾纤维化而不诱导高钙血症血浆。

项目成果

Structural basis for vitamin D receptor agonism by novel non-secosteroidal ligands

新型非分泌类固醇配体激动维生素 D 受体的结构基础

• DOI: 10.1016/j.febslet.2013.02.028
• 发表时间: 2013
• 作者: Lisa Asano; Ichiaki Ito; Naoyuki Kuwabara; Tsuyoshi Waku; Junn Yanagisawa; Hiroyuki Miyachi; Toshiyuki Shimizu
• 通讯作者: Toshiyuki Shimizu

Salidroside alleviates dexamethasone‐induced inhibition of bone formation via transforming growth factor‐beta/Smad2/3 signaling pathway

红景天苷通过转化生长因子β/Smad2/3信号通路减轻地塞米松诱导的骨形成抑制

• DOI: 10.1002/ptr.7711
• 发表时间: 2022-12-25
• 期刊: Phytotherapy Research
• 影响因子: 7.2
• 作者: B. Xie;Huan Zhou;Hongyu Liu;Shi;Chenhui Zhou;Daohua Xu
• 通讯作者: Daohua Xu

ビタミンDによる腎臓線維化抑制の分子メカニズム解析とそれに基づいた線維化治療薬への応用

维生素D抑制肾纤维化的分子机制分析及其在纤维化治疗药物中的应用

• 发表时间: 2012
• 作者: 伊藤一明;青木政人;和久剛;渡部達也;柳澤純
• 通讯作者: 柳澤純

ビタミンD受容体は非古典的制御機構で大腸癌細胞の浸潤を抑制する

维生素D受体通过非经典调节机制抑制结肠癌细胞侵袭

• 发表时间: 2010
• 作者: 伊藤一明;後藤夏華;大家祥平;川崎祥平;青木政人;柳澤純
• 通讯作者: 柳澤純