Development of a technique for selective chemical labeling and modification of intracellular proteins

开发细胞内蛋白质选择性化学标记和修饰技术

• 批准号: 23685038
• 负责人: TSUKIJI Shinya
• 金额: $ 9.82万
• 依托单位: Nagaoka University of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-11-18 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23685038/
• 关键词: 蛋白質ラベリング; アフィニティラベリング; 蛍光イメージング; 部位特異的変異法; 化学修飾; アフィニティラベル化; 蛋白質; リガンド; トシル化学; 細胞; FKBP12; 光クロスリンク; 蛋白質-蛋白質相互作用

Ligand-directed tosyl (LDT) chemistry is a technique that allows selective chemical labeling of specific (native) proteins in cells and in vivo. However, the LDT chemistry is still at the beginning stage, and thus its full potential has yet to be exploited. In this work, we first attempted to apply the LDT chemistry as a novel tool for live-cell fluorescence imaging of endogenous proteins. Using a newly-designed LDT reagent, we were able to selectively label endogenous FKBP12 with an organic fluorescent dye, Oregon Green (OG), in living mammalian cells. It was also possible to visualize the rapamycin-mediated complexation of the OG-labeled FKBP12 and DsRed-fused FRB inside of the cells by FRET imaging. Furthermore, in this work, we demonstrated that the chemical labeling rate and efficiency could be significantly improved by combining the LDT chemistry with the site-directed mutagenesis technique.

配体指导的甲苯酯（LDT）化学是一种技术，可以选择性化学标记细胞和体内特定（天然）蛋白。但是，LDT化学仍处于起步阶段，因此其全部潜力尚未得到利用。在这项工作中，我们首先尝试将LDT化学作为内源性蛋白的活细胞荧光成像的新工具。使用新设计的LDT试剂，我们能够在活哺乳动物细胞中选择性地将内源性FKBP12与有机荧光染料，俄勒冈绿（OG）标记。还可以通过FRET成像可视化OG标记的FKBP12和DSRED融合的FRB的雷帕霉素介导的络合。此外，在这项工作中，我们证明了化学标记速率和效率可以通过将LDT化学与位置定向的诱变技术相结合来显着提高。

项目成果

リガンド分子細工による新しいケミカルバイオロジー方法論の開拓

通过配体分子工程开发新的化学生物学方法

• 发表时间: 2013
• 作者: 松尾 勇志;新谷 恵;松林 伸幸;築地真也
• 通讯作者: 築地真也

Fluorophore Labeling of Native FKBP12 by Ligand-Directed Tosyl Chemistry Allows Detection of Its Molecular Interactions in Vitro and in Living Cells

• DOI: 10.1021/ja401956b
• 发表时间: 2013-05-08
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
• 影响因子: 15
• 作者: Tamura, Tomonori;Kioi, Yoshiyuki;Hamachi, Itaru
• 通讯作者: Hamachi, Itaru

日本化学会第93春季年会

第93届日本化学会春季年会

• 发表时间: 2013
• 作者: 松元深;大野敏信;他;會澤純雄，菊池亮太，菅 大輔，高橋 諭，平原英俊，成田榮一
• 通讯作者: 會澤純雄，菊池亮太，菅 大輔，高橋 諭，平原英俊，成田榮一

LDT化学による細胞内蛋白質間相互作用の光クロスリンク検出

使用 LDT 化学进行细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的光学交联检测

• 发表时间: 2012
• 作者: 田村朋則;築地真也;浜地格
• 通讯作者: 浜地格

LDT化学による細胞内FKBP12への光反応基導入と蛋白質間相互作用検出

将光反应基团引入细胞内 FKBP12 并使用 LDT 化学检测蛋白质-蛋白质相互作用

• 发表时间: 2012
• 作者: 田村朋則;築地真也;浜地格
• 通讯作者: 浜地格