薬物精神依存に関わる脳内グリア細胞機能に関する研究

药物心理依赖相关脑胶质细胞功能研究

基本信息

批准号：
16790051
负责人：
中川貴之
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

薬物精神依存におけるグリア細胞の役割を詳細に解析するため、薬物精神依存に重要な役割を果たす中脳腹側被蓋野(VTA)、側坐核(NAc)、および内側前頭前皮質(mPFC)をそれぞれ含む3枚の切片をラット胎仔より作製し、隣接させて共培養することにより中脳皮質辺縁脳切片共培養系を作製した。本脳切片共培養系中にVTAからNAcおよびmPFCに投射するTH陽性のドパミン神経が多数存在することを確認した。メタンフェタミン(METH)、モルヒネ、コカイン、MDMAを処置すると、細胞外へのドパミン遊離が濃度依存的に促進された。また、メタンフェタミン(1-1000μM)を48時間処置することにより、NAcおよびmPFCにおいて、アストロサイトの活性化を示す形態変化が観察されたが、VTAにおいてはそのような変化はほとんど認められなかった。また、NAcにおけるグリア型グルタミン酸トランスポーターGLT-1の発現変化をwestern blotおよび免疫染色により検討したところ、METHの処置により濃度依存的かつ有意なGLT-1発現量の減少が認められた。また、昨年度作製した放射性標識グルタミン酸トランスポーター(EAAT)阻害薬[^<125>I]I-BzA-TBOAおよび[^3H]EtB-TBOAを用いて、EAAT各サブタイプ(EAAT1-5)に対する結合親和性を求め、さらに、各サブタイプに対する既存のEAATリガンドのKi値を算出した。次に、ラット各脳部位に対する結合親和性(Kd値)および発現量(Bmax)を求めたところ、いずれの部位においても高親和性かつ高密度の結合が認められた。脳および脊髄の切片を用い、各領域における結合を測定し、さらにEAAT2選択的阻害剤を用いることにより、その分布および割合を算出した。

为了详细分析神经胶质细胞在精神药物依赖中的作用，我们研究了在精神药物依赖中发挥重要作用的腹侧被盖区（VTA）、伏隔核（NAc）和内侧前额叶皮层（mPFC）从大鼠胎儿中制备含有每种成分的三片切片并相邻共培养以创建中脑边缘脑切片共培养系统。我们证实，在这个脑切片共培养系统中，有许多 TH 阳性多巴胺神经元从 VTA 投射到 NAc 和 mPFC。用甲基苯丙胺 (METH)、吗啡、可卡因和 MDMA 治疗可促进细胞以浓度依赖性方式释放多巴胺。此外，通过甲基苯丙胺（1-1000μM）处理48小时，在NAc和mPFC中观察到表明星形胶质细胞活化的形态变化，但在VTA中几乎没有观察到这种变化。此外，通过蛋白质印迹和免疫染色检查了 NAc 中神经胶质谷氨酸转运蛋白 GLT-1 表达的变化，并且在用 METH 处理后观察到 GLT-1 表达呈浓度依赖性且显着降低。此外，使用去年生产的放射性标记谷氨酸转运蛋白(EAAT)抑制剂[^125I]I-BzA-TBOA和[^3H]EtB-TBOA，我们证明了与每种EAAT亚型(EAAT1-5)的结合。我们确定了亲和力并进一步计算了现有EAAT配体对于每个亚型的Ki值。接下来，测定每个大鼠脑区域的结合亲和力（Kd值）和表达水平（Bmax），并且在所有区域中观察到高亲和力和高密度结合。使用大脑和脊髓切片，我们测量了每个区域的连接性，并使用 EAAT2 选择性抑制剂进一步计算其分布和比例。