Aβペプチド捕獲型アルブミン製剤の開発とアルツハイマー病治療への応用

Aβ肽捕获白蛋白制剂的研制及其在阿尔茨海默病治疗中的应用

基本信息

批准号：
21659042
负责人：
小田切優樹
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Sojo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659042/
关键词：
ヒト血清アルブミン Aβ 変異体ファージドメイン Pichia酵母免疫沈降法

项目摘要

本年度はAβによる毒性の軽減や繊維化の抑制を可能とするAβ高捕獲型ヒト血清アルブミン(HSA)変異体の設計を最終目標とした。はじめに、HSA分子上のAβ結合部位のマッピングを行った。HSAが相同性の高い3つのdomainと6つのsub-domainから成り立つ点に着目し、domain I (dI)、domain III (d III)、domain IA-IIA (d IA-IIA)、domain IIB-III (d IIB-III)を提示した各display phageを作製した。次に、phageに提示したHSA-domainとAβの結合評価法についてELISA法での確立を行った。具体的には、HSA d IIB-IIIを提示したdisplay phageを作製し、helper phage(タンパク質非提示phage)をコントロールとした結合評価をELISAによって行った。その結果、helper phageと比較してHSA d IIB-III display phageとAβの強い結合が確認されたことから、phage上にdomainを提示させることで、各HSA-domainとAβとの結合評価が可能であると考えられた。そこで、dII、dIIB-IIIの2種に加え、今回新たに作成した3種のdisplay phageのタンパク質提示確認をELISAによって行った。その結果、すべてのdisplay phageにおいて抗HSA抗体に対する反応性がみられたことより、全てのHSA-domainが各phage上に提示していると考えられた。さらに、各domalnを提示したphageとAβとの結合実験から、AβはHSA分子上の全てのdomainに結合することが示唆された。

今年，最终目标是设计Aβ-HIGH捕获人血清白蛋白（HSA）突变体，以降低毒性并抑制纤维化。首先，映射了HSA分子上的Aβ结合位点。专注于HSA由三个域和六个具有高同源性的子域组成的事实，每个显示噬菌体都均由域I（di），域III（DIII），域IA-IIA（DIA-IIA）和域IIB-III（DIIB-III）（DIIB-III）（DIIB-III）组成。接下来，使用ELISA方法建立了用于噬菌体中HSA域和Aβ的结合评估方法。具体而言，制备了显示HSA D IIB-III的显示噬菌体，并使用助手噬菌体（非蛋白呈现噬菌体）作为对照对ELISA评估结合。结果，与助手噬菌体相比，HSA D IIB-III之间的强烈结合被证实，并且可以通过在噬菌体上显示一个域来评估每个HSA域和Aβ之间的结合。因此，除了两种类型的DII和DIIB-III外，我们还确认了使用ELISA的三种新创建的显示噬菌体的蛋白质表示。结果，所有显示噬菌体均显示出对抗HSA抗体的反应性，并认为所有HSA域都呈现在每个噬菌体上。此外，呈现每个DOMALN的噬菌体和Aβ之间的结合实验表明Aβ与HSA分子上的所有域结合。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Nitrosylated human serum albumin (SNO-HSA) induces apoptosis in tumor cells

DOI：
10.1016/j.niox.2009.09.003
发表时间：
2010-05-15
期刊：
NITRIC OXIDE-BIOLOGY AND CHEMISTRY
影响因子：
3.9
作者：
Katayama, Naohisa;Nakajou, Keisuke;Otagiri, Masaki
通讯作者：
Otagiri, Masaki

Structural insights into differences in drug binding selectivity between two forms of human {alpha}1-acid glycoprotein genetic variants, the A and Fl^* S forms.

对两种形式的人类 {α}1-酸性糖蛋白遗传变体（A 和 Fl^* S 形式）之间药物结合选择性差异的结构见解。

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
J Biol Chem.
影响因子：
0
作者：
Nishi K;Ono T;Nakamura T;Fukunaga N;Izumi M;Watanabe H;Suenaga A;Maruyama T;Yamagata Y;Curry S;Otagiri M.
通讯作者：
Otagiri M.

四塩化炭素誘発肝障害モデルラットにおけるヘモグロビン小胞体の体内動態の評価

四氯化碳肝损伤模型大鼠血红蛋白内质网药动学评价