血清アルブミンの新展開:ノックダウンレセプター及びエスコートプロテインとしての可能性

血清白蛋白的新进展：作为敲低受体和护送蛋白的潜力

基本信息

批准号：
14657618
负责人：
小田切優樹
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は組換えアルブミンを用いて薬物動態及びDDS研究への新しいアプローチを試みるものである。すなわち、本研究は、(1)アルブミン分子上の薬物結合部位を迅速かつ高精度に同定するアルブミン変異体の開発と(2)肝臓特異的に分布特性を示す変異体を用いて、インターフェロンを遺伝子工学的あるいは化学的に結合させた肝不全治療薬の製剤設計を目的として実施され、以下の知見が得られた。1.従来の化学修飾及びX線結晶構造解析データに基づき、サイトI結合に重要な役割を果たしていると考えられるアミノ酸残基、Lys-199、Arg-218、222、His-242、Ala-291を他のアミノ酸に置換させた(Lys-199→AlaあるいはVal;Arg-218、222→Ala;His-242→Phe;Ala29l→LysあるいはArg)変異体を作製してリガンド結合性を調べたところ、野生型に比べ、結合性の低下が認められたものの、サイトIをノックダウンするような変異体を見出すにはいたらなかった。2.主要糖化部位と考えられる199、439、525番目のLysをAlaに置換した3重変異体を^<111>Inでラベル化して静脈内投与し、生体内分布を調べた結果、この変異体は野生型に比べ、肝臓、特に肝内皮細胞に効率よく取り込まれることが明らかとなった。3.HSAの2つのcDNAをDNAリンカーを用いて結合させた配列を発現ベクターpPIC9Kに導入し、Pichia酵母GS115を用いて発現後、精製を行い、HSA dimmerを作製することに成功した。また、このHSA dimmerを^<111>Inでラベル化してマウスに静脈内投与し、生体内分布を検討した結果、生体内半減期がwild-typeの約2倍に延長し、血管外漏出を抑えた有効なrHSAであることが明らかとなった。以上のように興味ある知見は得られたものの、ノックダウンレセプターアルブミンの設計、さらにはアルブミン結合体の調製など検討課題を残すことになった。

这项研究尝试使用重组白蛋白进行药代动力学和DDS研究的新方法。换句话说，这项研究的目的是（1）开发一个白蛋白突变体，该突变体快速并准确地识别在白蛋白分子上的药物结合位点，以及（2）设计用于使用遗传性工程或化学结合的干扰素治疗肝衰竭的药物，使用具有肝特异性分布特征的突变体，并获得了以下发现。 1。基于常规化学修饰和X射线晶体结构分析数据，制备了突变体，其中氨基酸残基Lys-199，Arg-218，222，His-242和Ala-291和ALA-291（Lys-199→Ala或Val; arg-218，222→Ala; ara-222→ala; his-242→phe;检查突变体的配体结合。尽管与野生型相比，结合的结合降低了，但没有办法找到一个突变体击倒位点I. 2。一个三重突变体，在该位置处于199、439和525的位置，被认为是主要的糖化位点，用 ^<111>标记为主要的糖化位点，并在静脉内且静脉内被列出，并在静置的效果中被列入该效果。与野生型相比，尤其是肝内皮细胞。 3。将两个HSA的cDNA使用DNA接头结合的序列被引入表达矢量PPIC9K中，并在使用Pichia Yeast GS115表达后，将其纯化以产生HSA调光器。此外，该HSA Dimmer用 ^<111>在静脉内给小鼠标记，并检查了生物分布，并且发现生物分布情况，据显示，体内半寿命增加到野生型的两倍，并且是有效的RHSA，是有效的RHSA。尽管获得了上述有趣的发现，但仍有问题要考虑，例如敲低受体白蛋白的设计和白蛋白结合物的制备。