細胞内小器官トランスポータの新しい機能解析法の開発

开发细胞内细胞器转运蛋白功能分析的新方法

基本信息

批准号：
21659019
负责人：
金子周司
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

アルカンチオール自己組織化単分子層(self-assembled monolayer ; SAM)は、バイオ素子やセンシング素子への応用を目指して盛んに研究されている。そこでSAM上に生体膜脂質をコーティングし,さらにその上へ生化学的に調製した細胞膜断片を付着させた固相化細胞膜(solid-supported membrane ; SSM)を調製し、Surfer Oneシステムを用いることで、トランスポータ電流応答の記録を行った。今年度はラット脳より調製したシナプトソーム画分を用いて、シナプス小胞上のvATPase由来の電流応答をATPによってEC50値140μMで惹起させることに成功した。この応答は、bafilomycin A1やマグネシウムイオンによって阻害されたことから既報と一致する結果であることが確認された。現在までのところ、GABA輸送体VGAT、グルタミン酸輸送体VGLUTの応答には予備的な結果を除き成功していないため、これらの測定は今後の検討課題である。以上の結果からSSMを用いるトランスポータの電流応答測定はリガンドスクリーニングに有用であるだけでなく、輸送の駆動力やストイキオメトリの研究にも有用であることが示された。また、細胞内小器官に存在する起電性トランスポータやイオンチャネルの応答を測定することも可能であることがわかった。今後はさらに測定可能なトランスポータのレパートリーを増やす応用研究が必要になると考えられる。

Alkachi正在积极研究所有自组织的太阳化（SAM），目的是将其应用于生物子和感应元素。因此，基于固体的细胞膜（固体供应的梅拉烷； SSM），它在SAM上涂上生物识别脂质并粘附在其上的生物毒素细胞膜片段，用于使用冲浪者一个系统。。今年，由大鼠大脑制备的sinapto躯体成功地导致了vatpase衍生的突触质量的电流响应，其ATP的EC50值为140μm。已经证实，该反应与先前的报告相匹配，因为Bafilomycin A1和镁离子抑制了响应。迄今为止，这些测量值是未来的考虑问题，因为GABA运输VGAT和谷氨酰胺酸转运VGLUT的响应尚未成功。从以上结果来看，使用SSM对转运蛋白的当前响应测量不仅对配体筛选有用，而且对运输驱动力和利益研究研究也有用。还发现，可以测量耐受转运蛋白和细胞内器官中存在的离子通道的响应。将来，人们认为将需要进行应用研究以增加测量变压器的曲目。