グルタミン酸レセプター発現細胞を用いた海馬長期増強現象のシナプス前調節機構の解明

使用表达谷氨酸受体的细胞阐明海马长时程增强的突触前调节机制

• 批准号: 05857255
• 负责人: 金子 周司
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857255/
• 关键词: グルタミン酸レセプター; アフリカツメガエル; 卵母細胞; AMPAレセプター; 海馬; 長期増強; LTP; シナプス前調節; グルタミン酸レセプター; アフリカツメガエル; 卵母細胞; AMPAレセプター; 海馬; 長期増強; LTP; シナプス前調節

1.モルモット海馬切片標本を用い,苔状線維-CA3野のシナプスでのテラヌス刺激時による長期増強現象(LTP)に対してムスカリンレセプターサブタイプがどのように関与するか細胞外記録によって調べた。その結果,M1レセプターがLTPに対して促進的に作用するのに対して,M2レセプターはLTPを抑制することが明らかになった。このような相反的二重調節機構は外から適用したムスカリン性作動薬であるカルバコールの場合でも,内在性アセチルコリンによる調節の場合にも同様な結果であった。2.AMPAレセプターcDNAをヒト293細胞にトランスフェクションさせ,AMPAレセプタータンパク質を発現させた。その細胞を用いてグルタミン酸による細胞応答を電気生理学的に記録することには成功したが振幅が小さい上に脱感作が著しく,グルタミン酸センサーとして用いるにはさらに改良が必要であることが判明した。3.海馬切片に目的とする遺伝子を導入する新たな方法としてワクシニウイルスを用いる試みを行った。betaガラクトシダーゼを発現しうるワクシニウイルスベクターをモルモット海馬切片に導入することによって,数十時間以内に酵素活性がグリア細胞よりも神経細胞に特異的に現れることを見出した。今後,組織培養下にある海馬切片に目的遺伝子を導入し,シナプス前部におけるLTPの調節様式について解析を進めてゆく予定である。

1。使用豚鼠海马截面标本，我们研究了毒蕈碱受体亚型如何通过细胞外记录在苔藓纤维-CA3区域突触时在teranus刺激期间参与长期增强（LTP）。结果表明，M1受体促进了LTP，而M2受体抑制了LTP。这种相互的双调节机制在外部施用的毒蕈碱激动剂卡尔巴乔和内源性乙酰胆碱调节中都具有相似的结果。 2。将AMPA受体cDNA转染到人293细胞中以表达AMPA受体蛋白。使用细胞谷氨酸引起的电生理记录的细胞反应是成功的，但是幅度很小，脱敏是显着的，并且需要进一步改进作为谷氨酸传感器。 3。试图将疫苗病毒作为一种新方法，将目的基因引入海马切片。通过引入能够在豚鼠海马切片中表达β半乳糖苷酶的疫苗载体，发现在几十个小时内，与神经胶质细胞相比，神经元中的酶活性在神经元中的表现更高。将来，我们计划在组织培养下将靶基因引入海马切片，并分析突触前区域中LTP的调节。