グルタミン酸レセプター発現細胞を用いた海馬長期増強現象のシナプス前調節機構の解明

使用表达谷氨酸受体的细胞阐明海马长时程增强的突触前调节机制

基本信息

批准号：
05857255
负责人：
金子周司
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.モルモット海馬切片標本を用い,苔状線維-CA3野のシナプスでのテラヌス刺激時による長期増強現象(LTP)に対してムスカリンレセプターサブタイプがどのように関与するか細胞外記録によって調べた。その結果,M1レセプターがLTPに対して促進的に作用するのに対して,M2レセプターはLTPを抑制することが明らかになった。このような相反的二重調節機構は外から適用したムスカリン性作動薬であるカルバコールの場合でも,内在性アセチルコリンによる調節の場合にも同様な結果であった。2.AMPAレセプターcDNAをヒト293細胞にトランスフェクションさせ,AMPAレセプタータンパク質を発現させた。その細胞を用いてグルタミン酸による細胞応答を電気生理学的に記録することには成功したが振幅が小さい上に脱感作が著しく,グルタミン酸センサーとして用いるにはさらに改良が必要であることが判明した。3.海馬切片に目的とする遺伝子を導入する新たな方法としてワクシニウイルスを用いる試みを行った。betaガラクトシダーゼを発現しうるワクシニウイルスベクターをモルモット海馬切片に導入することによって,数十時間以内に酵素活性がグリア細胞よりも神経細胞に特異的に現れることを見出した。今後,組織培養下にある海馬切片に目的遺伝子を導入し,シナプス前部におけるLTPの調節様式について解析を進めてゆく予定である。

1.使用豚鼠海马切片，我们通过细胞外记录研究了毒蕈碱受体亚型如何参与由苔藓纤维-CA3突触处的地体刺激诱导的长时程增强（LTP）。结果表明，M1 受体促进 LTP，而 M2 受体则抑制 LTP。发现这种相互双重调节机制在外源性应用毒蕈碱激动剂卡巴胆碱的情况下和内源性乙酰胆碱调节的情况下是相似的。 2.将AMPA受体cDNA转染人293细胞，表达AMPA受体蛋白。尽管我们成功地利用这些细胞电生理记录了谷氨酸诱导的细胞反应，但幅度较小且脱敏显着，表明在其用作谷氨酸传感器之前还需要进一步改进。 3.我们尝试利用痘苗病毒作为将目的基因导入海马切片的新方法。通过将能够表达β-半乳糖苷酶的痘苗病毒载体引入豚鼠海马切片，我们发现在几十小时内，该酶活性在神经元中比在神经胶质细胞中更特异地出现。未来，我们计划将目的基因导入组织培养的海马切片中，分析LTP在突触前区的调控模式。