レチノイン酸投与下のマウス聴器奇形の発生機構に関する免疫組織学的研究

视黄酸给药小鼠听觉畸形发育机制的免疫组织学研究

基本信息

批准号：
13770948
负责人：
佐々木徹
金额：
$ 0.38万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770948/
关键词：
レチノイン酸アポトーシス聴器奇形 Hmx遺伝子

项目摘要

研究代表者は文部科学省在外研究員として平成14年9月より米国Mount Sinai医科大学Thomas Lufkin博士の研究室にて、環境的要因による聴器奇形ど遺伝子的要因による聴器奇形の比較研究を行っている。前者は昨年度に引き続き、レチノイン酸投与による聴器奇形であり、後者はHmx遺伝子欠損で見られる聴器奇形である。二つのタイプの奇形を比較検討することによりレチノイン酸が遺伝子発現のどのレベルで奇形を誘導しているのかを考察する。レチノイン酸約12.5mg/kgを妊娠6-9日目の間に妊娠マウスに投与すると18日目には、耳介低位、副耳、外脳症、小顎症、口蓋裂などが胎児に認められる。7日目投与胎児パラフィン連続切片では、外耳・中耳に外耳道閉鎖、耳小骨奇形、中耳腔の低形成などが認められる。こうした奇形はほぼ7日目投与群のみで見られ、聴器奇形の成立臨界期は7日目と推定している。また細胞死(アポトーシス)によるDNA断片を認識するTUNEL法による観察では、9日目胎児にて、耳胞腹側のTUNEL陽性細胞数が減少すうること、また、各鰓弓の中枢側付近に密集して見られるTUNEL陽性細胞の密度が低いことが観察された。6日目、8日目胎児についても同様の観察を行っている。Hmx遺伝子群のうち、Hmx2またはHmx3欠損マウスは内耳を中心に奇形を示すことが既に報告されている。研究代表者は昨年、Hmx1遺伝子ノックアウトマウスの作成に成功し、外耳に明らかな奇形(外耳の聳立、円形の耳介)を確認した。さらに12日目胎児の組織切片にて内リンパ管の拡大、前庭の拡大などの所見を認めている。一連の研究の結果はこれまでの結果は1つの国内学会、2つの国際学会にて発表した。英語論文は環境因子による聴器奇形および遺伝子欠損による聴器奇形それぞれにつき、投稿準備中である。

主要研究者自2002年9月起作为文部科学省海外研究员在美国西奈山医学院Thomas Lufkin博士实验室工作，进行听力对比研究环境因素引起的畸形和遗传因素引起的听力畸形。延续去年的说法，前者是因服用维甲酸引起的听力畸形，后者是因Hmx基因缺陷引起的听力畸形。通过比较两种类型的畸形，我们将考虑视黄酸在什么水平的基因表达水平下会诱发畸形。在怀孕第6天至第9天给怀孕小鼠施用约12.5mg/kg视黄酸时，在第18天时，在小鼠中观察到低位耳、副耳、外露、小颌畸形和腭裂等症状。胎儿。第 7 天对胎儿进行连续石蜡切片显示外耳和中耳的耳道闭合、听小骨畸形以及中耳腔发育不全。这些畸形大多仅在第7天给药组中出现，估计听力畸形形成的关键期是在第7天。此外，使用识别细胞死亡（细胞凋亡）引起的 DNA 片段的 TUNEL 方法观察发现，在 9 天的胎儿中，耳囊腹侧的 TUNEL 阳性细胞数量减少，并且出现了耳囊腹侧 TUNEL 阳性细胞数量减少观察到 TUNEL 阳性细胞密度较低，且聚集在一起。对第 6 天和第 8 天的胎儿也进行了类似的观察。据报道，Hmx基因组中Hmx2或Hmx3缺陷的小鼠主要表现出内耳畸形。去年，主要研究者成功培育出Hmx1基因敲除小鼠，并证实其外耳存在明显畸形（外耳凸起、耳廓圆形）。此外，12天胎儿的组织切片中还观察到内淋巴管增大和前庭增大等现象。目前该系列研究成果已在一次国内会议和两次国际会议上发表。目前正在准备提交关于环境因素引起的听力畸形和遗传缺陷引起的听力畸形的英文论文。