ジストロフィン複合体に着目したデュシェンヌ型筋ジストロフィー症知的障害の分子病態

杜氏肌营养不良症智力障碍的分子病理学，重点关注肌营养不良蛋白复合物

• 批准号: 21791001
• 负责人: 丹藤 創
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21791001/
• 关键词: 小児神経学; デュシェンヌ型筋ジストロフィー; ジストロフィン

1.新規構成分子の同定独自に作製したN末端配列認識抗dystrophin抗体によって、C末端を欠く低分子量dystrophinのアイソフォームが初めてタンパクレベルで認識された。そこで、当該N末端認識抗dystrophin抗体による免疫沈降(IP)とSDS-PAGEにより、低分子量dystrophinの新規複合体候補とみなされるものを含む画分に着目し質量分析(TOF-MS)(受託解析)を行った。複合体候補分子として、シナプス関連蛋白、CaM kinase IIが含まれ、入手できる市販抗体を用いて、IP後や2-D PAGE後のWB法で、新規複合体構成分子であることを確認した。2.免疫組織化学的手法による解析共焦点レーザ顕微鏡を用いた蛍光免疫組織化学により、1で確認された新規複合体構成分子と低分子量dystrophinが神経細胞シナプスにおいて共局在するかを確認した。胎生17.5日のマウス胎仔脳海馬神経細胞の初代培養細胞を用いて、分散培養10日後、突起伸長、シナプス形成を確認したのち、蛍光免疫三重染色を行った。すなわち、N末端認識抗dystrophin抗体、市販のC末端認識抗dystrophin抗体、1で確認された複合体候補シナプス関連分子に対する抗体を用いて、C末端を欠く低分子量dystrophinが複合体候補シナプス関連分子と特異的に共局在することを解析した(論文作成中)。

1。鉴定新型组成分子的低分子量肌营养不良蛋白的同工型首次通过独特制备的N末端序列 - 鉴定抗疾病抗体抗体在蛋白质水平上识别出蛋白质水平。因此，使用N端识别抗肌营养抗体抗体和SDS-PAGE对质谱（TOF-MS）（委员会分析​​）进行了免疫沉淀（IP）进行，重点是含有那些被认为是那些被认为是低分子量的新型复合物的分数。复合物的候选分子包括与突触相关的蛋白凸轮激酶II，并使用可用的商业抗体，证实它是一种新型的组成分子，该分子在IP或2-D页面后使用WB方法。 2。使用共聚焦激光显微镜进行免疫组织化学分析，我们证实了新型复合物成分分子是否在1中证实，低分子量稳定性肌营养不良蛋白共定位在神经元突触中。分散培养后10天，使用小鼠的胎儿脑海马神经元的原发性细胞17.5天用于确认突起和突触形成，然后进行免疫荧光免疫染色三重染色。 In other words, using N-terminal recognition anti-dystrophin antibodies, commercially available C-terminal recognition anti-dystrophin antibodies, and antibodies directed against candidate synapse-related molecules confirmed by 1, we analyzed that low-molecular weight dystrophin lacking the C-terminus specifically colocalized with candidate synapse-related molecules (in the process of写作）。