予後不良がんの予知と克服を目指したオーロラ関連分子の細胞内ダイナミクス研究

极光相关分子的细胞内动力学研究旨在预测和克服癌症的不良预后

基本信息

批准号：
21591730
负责人：
達家雅明
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Prefectural University of Hiroshima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

予後不良がんの予知と克服を目指したオーロラ関連分子の細胞内ダイナミクスを解明するために、本年度は次の実験をおこなった。(1) ヒト大腸がん組織サンプルを用いた発現分布と予後不良との「相関関係」を明らかにするために、外科手術時に得られる組織よりがん部分と周辺正常部分を分離し、それぞれ、病理組織切片を作成後、病理免疫組織染色により解析をおこなった結果こオーロラ関連分子の中で、baculoviral IAP repeat-containing 5 (BIRC5)/apoptosis inhibitor 4/survivinが正常組織と較べて大腸癌組織での高い発現が最も広く認められ、細胞質にsurvivin陽性を認める症例において予後不良との相関があることがわかった。また、外科手術直後に得た非固定非凍結サンプルから細胞質可溶性画分、細胞核可溶性画分、そして不溶性画分(細胞質と細胞核の骨格構造構成蛋白質)の蛋白質を分画抽出し、細胞蛋白質分画後の免疫ブロットをおこなったところ、界面活性剤不溶性画分に加えて、界面活性剤可溶性細胞質画分ならびに核画分に検出される症例があった。これら界面活性剤可溶性画分でのsurvivin陽性症例ほリンパ節転移の症例であり、今後、症例数を増やして統計処理をおこなう予定である。(2) 非転移性の培養細胞をモデルに、EGFP標識したオーロラ関連分子を発現させ、その蛋白質細胞内ダイナミクスを解析した結果、EGFP-survivinを発現させた場合に、アノイキス(接着細胞の接着離脱時に起こるアポトーシスの一形態)に抵抗性となることがわかった。すなわち、survivinはがん転移過程での転移成立に大きな生物学的な障壁のひとつであるアノイキスを克服させてしまうことが示唆された。この時、EGFP-survivinは界面活性剤可溶性画分に分画される。一方、survivinの抗アポトーシスのシグナルを仲介する分子と目されているX-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP)も界面活性剤可溶性画分に分画されてEGFP-survivinとの細胞内での結合が免疫沈降実験で確かめられた。また、一方、EGFP-survivinによるアノイキス抑制過程でc-jun N-terminal Kinase (JNK)シグナルが抑制されており、XIAPを介したnuclear factor-kappa B (NF-κB)抑制の結果JNK経路が抑制されることによってアノイキス抑制が起こると推察された。

今年，我们进行了以下实验，以阐明旨在预测和克服预后不良的癌症的Aurora相关分子的细胞内动力学。（1）为了阐明使用人结肠癌组织样本的表达分布和预后不良之间的“相关性”，将癌症部分和周围正常部分与手术期间获得的组织分离，并在准备病理组织切片后，通过病理学的免疫组织构成了AURORA-REACULES 5反复分解（BATOPIRAL RECOPIRAL IAP），牛皮体iAp-apotriral iApiral iApiral iApiral iApiral iApiral iApiral iApiral iapiral iapiral iapiral iapiral iapiral iapiral iapiral iApiral iAp-cotiral ichotical I.与正常组织相比，抑制剂4/survivin是结肠癌组织中最广泛观察到的，发现在细胞质中幸存阳性的情况下，预后较差。此外，从细胞质溶剂分数，核溶剂馏分和不溶性组分（细胞质和细胞核的骨骼结构组成的骨骼结构组成的蛋白质）中被从非固定的，非肉质样品中从手术后立即获得的非固醇样品，并在细胞蛋白质后立即从非固定的，非肉质样品中提取。除了表面活性剂不溶性部分外，在某些情况下，在表面活性剂可溶性细胞质馏分中检测到该蛋白质。这些表面活性剂可溶性部分中的表面阳性病例是淋巴结转移的病例，我们计划将来增加病例数量并进行统计治疗。（2）使用非转移性培养的细胞作为模型，表达了与Aurora相关的分子并分析蛋白质的细胞内动力学，并且当表达EGFP - 苏尔维素时，发现EGFP-Survivin时，EGFP-SURVIVIN表示EGFP - 表达时，它会在Anooikis中抗性时（Ano a apopiss sodem pode），在apopsos的形式上）被启用。换句话说，有人建议Survivin将克服Anoikis，这是癌症转移过程中转移成功的主要生物学障碍之一。目前，将EGFP - 苏尔维温分馏为表面活性剂馏分。同时，将X连锁的凋亡蛋白（XIAP）抑制剂（被认为是介导Survivin的抗凋亡信号的分子）也被分馏为表面活性剂可溶性馏分，并在免疫原摄取实验中证实了与EGFP-纯素结合的细胞内结合。另一方面，在通过EGFP-Survivin抑制Anoikis的过程中，C-JUN N末端激酶（JNK）信号被抑制，并且据估计，当通过通过XIAP抑制JNK PATH抑制核因子-kappa B（NF-κB）时，就会发生Anoikis抑制。