アポトーシスシグナルにおける活性酸素の意義

活性氧在细胞凋亡信号中的意义

• 批准号: 01J60080
• 负责人: 佐藤 勉
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J60080/
• 关键词: アポトーシス; 活性酸素

Fas刺激がJurkat細胞にアポトーシスを誘導する際,Apaf-1,procaspase-9およびcytochrome cはアポトソーム複合体を形成し,その結果,アポトーシスの実行に必須であるprocaspase-3が活性化される.まず,我々は抗procaspase-9抗体を用いた免疫沈降法により,Fas刺激でアポトソーム形成が誘導されることを確認した.次に,NACやMnSOD遺伝子導入によって活性酸素を消去したところ,アポトソームの形成は著明に抑制された.更に,この結果をゲル濾過法によって確認した.これらの結果から,活性・酸素はアポトソーム複合体形成を促進することによってアポトーシスシグナルに関与すると推測された.2.上述した仮説をin vitroで証明することを目的に,Apaf-1およびprocaspase-9の発現ベクターを構築した.in vitro translation法によってこれらの蛋白を合成し,ヒト胎盤から精製したcytochrome cとあわせ,in vitroでアポトソームの形成を再現した.上記3種類の蛋白を一括して還元剤で処理したところ,アポトソームの形成は阻害されたが,更に酸化剤で処理すると複合体形成能は回復した.また,3種類の蛋白を別個に還元剤で処理したところ,Apaf-1を処理した場合にだけアポトソームの形成阻害が観察された.これらの結果から,活性酸素によるアポトソーム複合体形成の促進は,Apaf-1が酸化されることによって引き起こされると考えられた.

当 Fas 刺激诱导 Jurkat 细胞凋亡时，Apaf-1、procaspase-9 和细胞色素c 形成凋亡体复合物，从而激活执行细胞凋亡所必需的 procaspase-3。首先，我们使用抗 procaspase-9 抗体进行免疫沉淀，证明了 Fas 刺激可诱导凋亡体形成。我们证实NAC和MnSOD被诱导。当通过基因转移消除活性氧时，通过凝胶过滤进一步证实了该结果，推测活性氧促进了凋亡体复合物的形成。为了在体外证明这一点，我们构建了Apaf-1和procaspase-9的表达载体。这些蛋白通过体外翻译方法合成，并与从人胎盘中纯化的细胞色素c结合，我们在体外重现了凋亡体的形成，当用还原剂处理上述三种类型的蛋白质时，凋亡体的形成受到抑制，但当进一步用氧化剂处理时，形成复合物的能力得到恢复。三种类型的蛋白质分别用还原剂处理。结果，仅当用Apaf-1处理时才观察到凋亡体形成的抑制。这些结果表明活性氧对凋亡体复合物形成的促进是由Apaf-1的氧化引起的。

项目成果

Matsunaga T, Sato T, et al.: "Interaction between leukemic-cell VLA-4 and stromal fibronectin is a decisive factor for minimal residual disease of acute myelogenous leukemia."Nat Med. 9(9). 1158-1165 (2003)

Matsunaga T、Sato T 等人：“白血病细胞 VLA-4 和基质纤连蛋白之间的相互作用是急性髓性白血病微小残留病的决定性因素。”Nat Med。

Takahashi M, Sato T, et al.: "E1B-55K-deleted adenovirus expressing E1A-13S by AFP-enhancer/promoter is capable of highly specific replication in AFP-producing hepatocellular carcinoma and eradication of established tumor."Mol Ther. 5(5Pt1). 627-634 (2002

Takahashi M、Sato T 等人：“通过 AFP 增强子/启动子表达 E1A-13S 的 E1B-55K 缺失腺病毒能够在产生 AFP 的肝细胞癌中高度特异性复制并根除已形成的肿瘤。”Mol Ther。

Hagiwara S, Sato T, et al.: "Inhibition of type I procollagen production by tRNAVal CTE-HSP47 ribozyme."J Gene Med. 5(9). 784-794 (2003)

Hagiwara S、Sato T 等人：“tRNAVal CTE-HSP47 核酶抑制 I 型原胶原产生。”J Gene Med。

Kawano Y, Sato T, et al.: "Ex vivo expansion of human umbilical cord hematopoietic progenitor cells using a coculture system with human telomerase catalytic subunit (hTERT) transfected human stromal cells."Blood. 101(2). 532-540 (2003)

Kawano Y、Sato T 等人：“使用与人端粒酶催化亚基 (hTERT) 转染的人基质细胞共培养系统，对人脐带造血祖细胞进行离体扩增。”血液。

Sasaki H, Sato T, et al.: "Induction of heat shock protein 47 synthesis by TGF-beta and IL-1 beta via enhancement of the heat shock element binding activity of heat shock transcription factor 1."J Immunol. 168(10). 5178-5183 (2002)

Sasaki H、Sato T 等人：“TGF-β 和 IL-1β 通过增强热休克转录因子 1 的热休克元件结合活性诱导热休克蛋白 47 合成”。