レトロウイルス発現系を用いた発癌関連miRNAの探索

利用逆转录病毒表达系统寻找致癌相关的miRNA

• 批准号: 20659151
• 负责人: 野阪 哲哉
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659151/
• 关键词: miRNA; microRNA; レトロウイルスベクター; 発癌; 造血細胞腫瘍

当研究の目的は、遺伝子発現効率の良いレトロウイルス発現系を用いて、主に造血器腫瘍に関与するマウスmicroRNA(miRNA)を同定し、新規の発癌分子機構を明らかにするとともに、新たな治療法の開発に応用することである。我々はまず、MLL(Mixed Lineage Leukemia)関連白血病の癌化に関連するようなmiRNAの探索から開始した。最初に、4-hydroxytamoxifen(4-HT)の除去によりMLL-ENL(-Estrogen Receptor(ER))の作用を消失させた時に、造血細胞において発現レベルが変化するmiRNAをmicroarrayにて探索した。その結果、miR-XXX(未発表データ)の発現上昇が観察され、real time PCR法にて、確認した。miR-XXX自体は癌抑制遺伝子的に働いている可能性が考えられる。即ち、癌遺伝子的に働く遺伝子の発現を抑える遺伝子である可能性が高い。次に、MLL-ENLでtransformした細胞におけるmiR-XXXの強発現や、造血細胞におけるmiR-XXXのノックダウンの表現型を解析し、その標的遺伝子を明らかにする目的で、U6プロモーターを用いた、shRNA発現用のレトロウイルスself-inactivationベクターを構築した。現在、miR-XXXの機能解析を行い、引き続き、他のmiRNAの探索・機能解析も行っている。上記shRNA発現用レトロウイルスベクターは初代培養細胞などで特定の遺伝子を手軽に恒常的にノックダウンさせ、当該遺伝子機能を解析する際にも役立つ。実際、純化した造血幹細胞を用いて、それらの細胞において特異的に発現している遺伝子を複数同定したが(未発表データ)、それらをノックダウンすることにより、造血幹細胞における癌遺伝子発現による癌化が部分的に抑制されることが判明した。miRNAを含めた統合的遺伝子機能解析が造血器腫瘍発生機構の解明にとって重要である。

本研究的目的是利用具有高基因表达效率的逆转录病毒表达系统来鉴定主要参与造血肿瘤的小鼠microRNA（miRNA），阐明致癌的新分子机制，并应用于新疗法的开发。法律的。我们首先寻找与 MLL（混合谱系白血病）相关白血病的癌症转化相关的 miRNA。首先，我们使用微阵列来寻找当MLL-ENL（-雌激素受体（ER））的作用因4-羟基他莫昔芬（4-HT）的去除而消除时，造血细胞中表达水平发生变化的miRNA。结果，观察到 miR-XXX（未发表的数据）表达增加，这通过实时 PCR 得到证实。人们认为miR-XXX本身可能具有抑癌基因的功能。换句话说，这很可能是一个抑制癌基因表达的基因。接下来，我们利用U6启动子分析了MLL-ENL转化细胞中miR-XXX的强表达以及造血细胞中miR-XXX的敲低表型，并明确了靶基因，构建了逆转录病毒自失活载体。用于 shRNA 表达。我们目前正在对 miR-XXX 进行功能分析，并继续寻找其他 miRNA 并进行功能分析。上述用于shRNA表达的逆转录病毒载体可用于轻松且持续地敲低原代培养细胞中的特定基因并用于分析该基因的功能。事实上，使用纯化的造血干细胞，我们鉴定了在这些细胞中特异性表达的多个基因（未发表的数据被发现被部分抑制）。包括miRNA在内的整合基因功能分析对于阐明造血肿瘤发生的机制具有重要意义。

项目成果

Expression of ADAMTS4 in Ewing's sarcoma.

• DOI: 10.3892/ijo_00000706
• 发表时间: 2010-09
• 期刊: International journal of oncology
• 影响因子: 5.2
• 作者: K. Minobe;R. Ono;A. Matsumine;F. Shibata-Minoshima;K. Izawa;T. Oki;J. Kitaura;T. Iino;J. Takita;S. Iwamoto;H. Hori;Y. Komada;A. Uchida;Y. Hayashi;T. Kitamura;T. Nosaka

MLL-ENL融合遺伝子は造血幹細胞のみを標的として形質転換を生じる

MLL-ENL融合基因仅针对造血干细胞并引起转化

• 发表时间: 2009
• 作者: 小埜良一;桝屋正浩;宮田恵里;中島秀明;上迫努;伊藤守;鈴木圭;片山直之;北村俊雄;野阪哲哉
• 通讯作者: 野阪哲哉

Twisted gastrulation lutation suppresses skeletal defect phenotypes in Crossveinless 2 mutant mice.

扭曲的原肠胚形成抑制 Crossveinless 2 突变小鼠的骨骼缺陷表型。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Mech Dev 125
• 作者: Ikeya M;Nosaka T;Fukushima K;Kawada M;Furuta Y;Kitamura T;Sasai Y.
• 通讯作者: Sasai Y.

FLT3-ITD induces ara-C resistance in myeloid leukemic cells through the repression of the ENT1 expression

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2009.10.094
• 发表时间: 2009-12-18
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Jin, Guilan;Matsushita, Hiromichi;Miyachi, Hayato
• 通讯作者: Miyachi, Hayato

Cv2, functioning as a pro-BMP factor via twisted gastrulation, is required for early development of nephron precursors

• DOI: 10.1016/j.ydbio.2009.11.013
• 发表时间: 2010-01-15
• 期刊: DEVELOPMENTAL BIOLOGY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Ikeya, Makoto;Fukushima, Kumi;Sasai, Yoshiki
• 通讯作者: Sasai, Yoshiki