核小体破壊よりみたHIV-1による細胞致死機構の解析

从核仁破坏角度分析HIV-1的细胞致死机制

基本信息

批准号：
05807026
负责人：
野阪哲哉
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1994
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05807026/
关键词：
HIV-1 Rev蛋白核小体リボゾーム B23蛋白

项目摘要

HIV-1 RevをCOS7細胞にtransfectし過剰発現させると、Revは核小体内に蓄積し、核小体は膨満後破壊される。この時、核小体内にはrRNAが蓄積し、宿主細胞のrRNA生合成は、ほぼ完全にblockされている。BHK細胞でinducibleにRevを発現する細胞株を作製し検討すると、やはり同様の現象が観察され、さらに、Revを発現したBHK細胞では、細胞の増殖が完全に抑制され、最終的に死に至る。このようなRevの細胞傷害作用には、核小体移行シグナル(NOS)と呼ばれる塩基性に富んだ配列と、multimerization domainが必要である。さらに、実際にHIV-1に急性感染したTリンパ球でもRevによる核小体破壊が生じていることを確認した(Nosaka et al.Exp.Cell Res.1993)。我々は、このようなRevの細胞傷害作用は、Revと何らかの核小体内成分との相互作用に由来すると想定し、まず、生化学的にRevと結合することが知られている核小体蛋白B23のRev発現細胞内での動態を検討した。RevとB23は、細胞周期を通してco-localizeし、rRNAのprocessingを阻止すると、Revは、B23と共にreversibleに核質内にtranslocateした。これらのことは、B23がRevの細胞内輸送に深く関与していることを示唆している。また、Revにより核小体が破壊された細胞においては、膨満した核小体内にB23が蓄積していた。B23の機能として、ribosomal particlesの輸送が提唱されている。RevがB23の機能を阻害してribosomeのtransportをblock、細胞死を誘導する可能性もある(投稿準備中)。今後は、Rev,B23,rRNAの間の結合活性の特異性を検討することにより、Revがリボゾームの輸送というB23の機能に及ぼす影響について調べ、Revによる細胞致死機構を解析する予定である。

当 HIV-1 Rev 转染到 COS7 细胞并过度表达时，Rev 会在核仁中积聚，核仁会膨胀并被破坏。此时，rRNA在核仁内积聚，宿主细胞内的rRNA生物合成几乎完全被阻断。当我们创建并研究在BHK细胞中诱导表达Rev的细胞系时，观察到类似的现象，并且在表达Rev的BHK细胞中，细胞增殖被完全抑制并最终导致死亡。 Rev 的这种细胞毒性作用需要一个称为核仁定位信号 (NOS) 的高度碱性序列和一个多聚化结构域。此外，我们证实即使在急性感染 HIV-1 的 T 淋巴细胞中，Rev 也会造成核仁破坏（Nosaka 等人 Exp. Cell Res. 1993）。我们假设 Rev 的细胞毒性作用源自 Rev 与核仁内某些成分之间的相互作用。我们研究了 Rev 表达细胞中 B23 的动态。 Rev 和 B23 在整个细胞周期中共定位，一旦 rRNA 加工被阻断，Rev 就会与 B23 一起可逆地易位到核质中。这些发现表明 B23 深度参与 Rev. 的细胞内转运。此外，在核仁被Rev破坏的细胞中，B23在肿胀的核仁内积累。核糖体颗粒的运输已被认为是 B23 的功能。 Rev 也有可能抑制 B23 功能、阻断核糖体运输并诱导细胞死亡（为提交做准备）。未来，我们计划通过检测Rev、B23和rRNA结合活性的特异性，研究Rev对B23核糖体转运功能的影响，并分析Rev引起的细胞杀伤机制。