DNA修復におけるRad51とP53遺伝子の役割

Rad51 和 P53 基因在 DNA 修复中的作用

基本信息

批准号：
11138252
负责人：
森田隆
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、放射線や化学物質によるDNA損傷がもたらす発がん過程において、p53タンパクとDNA二重鎖切断の修復をおこなうRAD51タンパクや減数分裂特異的組換えタンパクDMC1タンパクがどのように細胞周期を停止させDNAを修復するか、あるいはアポートシスを導き、がんの発生を抑制しているかを明らかにすることである。我々は、DMC1タンパクが、がん抑制タンパクp53と結合していることを明らかにした。さらにp53タンパクのDNA結合部位に対してDMC1タンパクのC末端が結合することを示した。この結合はゲルシフトアッセイにより、DMC1タンパクのDNA結合性を阻害しないことから、DMC1の対合や組換え活性へのネガティブな影響は少ないと考えられる。また、p53タンパクとDMC1タンパクの相互作用がin vivoにおいて、どのような機能をもつか明らかにするためにDmc1-p53ダブルノックアウトマウスを作製した。その結果、Dmc1遺伝子欠損による対合, 減数分裂停止とアポトーシスに顕著な変化はみられなかった。このことから、対合不全に伴う減数分裂停止細胞のアポトーシスには別の経路が存在すると考えられる。しかし、アポトーシス過程で、核は凝集しているがTUNEL法でネガティブな核も多く、アポトーシスが遅延していると考えられる細胞が観察されたことからp53タンパクがアポトーシスの進行の促進に関与している可能性が示唆され、今後の詳細な検討が必要である。

本研究的目的是研究p53蛋白、修复DNA双链断裂的RAD51蛋白和减数分裂特异性重组蛋白DMC1在辐射或化学物质引起的DNA损伤引起的致癌过程中如何控制细胞周期。目的是查明它是否能阻止癌症并修复 DNA，或诱导细胞凋亡并抑制癌症发展。我们发现 DMC1 蛋白与肿瘤抑制蛋白 p53 结合。此外，我们还发现 DMC1 蛋白的 C 末端与 p53 蛋白的 DNA 结合位点结合。由于通过凝胶位移测定这种结合不会抑制DMC1蛋白的DNA结合特性，因此认为它对DMC1配对和重组活性几乎没有负面影响。此外，为了阐明p53和DMC1蛋白在体内相互作用的功能，我们构建了Dmc1-p53双敲除小鼠。结果，由于 Dmc1 基因缺失，没有观察到配对、减数分裂停滞或细胞凋亡方面的显着变化。这表明，由于配对失败，减数分裂停滞的细胞凋亡还有另一种途径。然而，在细胞凋亡过程中，细胞核聚集，但TUNEL法显示许多细胞核呈阴性，并且观察到一些被认为细胞凋亡延迟的细胞，表明p53蛋白参与促进细胞凋亡的进展。表明有可能有问题，还需要进一步详细研究。