エンドセリンによる口腔顔面痛誘発メカニズムの解明

内皮素诱导口面部疼痛机制的阐明

基本信息

批准号：
24592810
负责人：
小野堅太郎
金额：
$ 3.49万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

エンドセリンはET_A受容体とET_B受容体が同定されている。ETA受容体を介した疼痛発生が知られており、ET_B受容体は逆に鎮痛効果を示すとの報告がある。しかしながら、三叉神経節ニューロンには後根神経節ニューロンには発現していないET_B受容体が発現しているとの報告がある。これまでに三叉神経節ニューロンにおける細胞レベルでのエンドセリン作用を調べた報告はなく、口腔顔面領域でのエンドセリン疼痛発生機構は不明である。そこで本研究では、三叉神経節ニューロンにおけるエンドセリン受容体発現と細胞機能について明らかにし、各口腔顔面疼痛モデルにおけるエンドセリンの関与について明らかにすることであった。まずラット単離三叉神経節ニューロンにおけるエンドセリンの作用について検討した。パッチクランプ実験において三叉神経節ニューロンはエンドセリン-1投与によりカプサイシン誘発内向き電流を促進し、この促進はPKC抑制薬によって抑制された。免疫染色法によりエンドセリン-1刺激はPKC_εの膜移行を誘発し、この反応ETB受容体拮抗薬BQ-788ではなく、ETA受容体拮抗薬BQ-123により抑制された。一方、カルシウムイメージング法においてエンドセリン-1は細胞内カルシウム濃度を上昇させたが、BQ-123ではなくBQ-788により抑制された。これらの結果は、ラット三叉神経節ニューロンはET_A受容体活性化によりPKC_εの膜移行によるカプサイシン受容体TRPV1チャネルを感作させ、ET_B受容体活性化により細胞内カルシウム動員を誘導することを示唆する。ラット鼻毛部にエンドセリン-1を投与することによって、疼痛関連行動の1つである顔面グルーミング時間が延長した。ラット由来乳癌細胞を鼻毛部に接種することにより得られる顔面癌モデルにおいて、顔面グルーミング時間の延長がETA受容体拮抗薬BQ-123により抑制された。歯周病疼痛モデルと口内炎疼痛モデルの作成に成功したので、受容体拮抗薬の作用については今後検討する予定である。

ET_A和ET_B受体已被鉴定为内皮素。已知通过ETA受体产生疼痛，据报道ET_B受体对相反的镇痛作用。然而，据报道，三叉神经节神经元表达在背根神经元中未表达的ET_B受体。迄今为止，尚无报告研究三叉神经节神经元细胞水平的内皮素作用的报道，并且尚不清楚口服区域内皮素疼痛产生的机理。因此，这项研究旨在阐明三叉神经节神经元中内皮素受体和细胞功能的表达，以及内皮素在每个口服疼痛模型中的参与。首先，我们研究了内皮素对大鼠分离的三叉神经节神经元的影响。在斑块夹实验中，三叉神经节神经元通过施用内皮素-1促进了辣椒素诱导的向内电流，而内皮素-1被PKC抑制剂抑制。通过免疫染色，内皮素-1刺激会诱导PKC_ε的膜易位，并被ETA受体拮抗剂BQ-123抑制，而不是反应性ETB受体拮抗剂BQ-788。另一方面，内皮素-1增加了钙成像中细胞内钙的浓度，但被BQ-788而不是BQ-123抑制。这些结果表明，大鼠三叉神经节神经元通过ET_A受体激活对PKC_ε的膜易位使辣椒素受体TRPV1通道敏感，并通过ET_B受体激活诱导细胞内钙募集。内皮素-1用于大鼠鼻毛，这是与疼痛相关的行为之一，长时间的面部修饰时间。在通过将大鼠来源的乳腺癌细胞接种到鼻毛中获得的面部癌模型中，ETA受体拮抗剂BQ-123抑制了长时间的面部修饰时间。由于我们成功地创建了牙周疾病疼痛模型和一个口腔口腔炎疼痛模型，因此我们计划将来研究受体拮抗剂的影响。