表皮細胞由来エンドセリン1によるメラノサイト増殖とメラニン産生機構の解明

阐明表皮细胞来源的内皮素1对黑色素细胞增殖和黑色素产生的机制

• 批准号: 09770665
• 负责人: 脇坂 長興
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770665/
• 关键词: チロジナーゼ; ETb受容体; ETa受容体; エンドセリン1; BQ123; RES701-1; 色素細胞; メラノサイト; エンドセリン-1; メラニン; 表皮細胞; ET_A受容体; ET_B受容体; EIA

色素細胞に、ET-1受容体が多量に存在し、チロジナーゼ媒介性メラニン生成機構にET-1が関与していることが判明して以来、色素沈着機構とET-1の関係が研究されてきた。しかし、色素細胞に影響するET-1を産生する細胞に対しても不明な点が多い。lnoueらは、色素細胞に影響するET-1供給源を分化誘導時の表皮細胞に由来する可能性を報告しているが、色素細胞との相互作用に関しては報告されていない。そこで今回、前編で確立したチロジナーゼEIAシステムを用いて、ET-1による培養色素細胞のチロジナーゼ酵素発現調節機構の解明を試みた。その結果ET-1を培地中に共存させ、色素細胞を培養すると色素細胞の増殖は、培養4日目以降ET-1添加濃度に依存して亢進した。そこでコンフルエントな色素細胞に、色素細胞の増殖を明らかに亢進する1-100nMET-1含有培地と共に48時間培養し、色素細胞内のチロジナーゼ蛋白の発現を検討すると、ET-1濃度用量依存的にチロジナーゼ蛋白の発現の増強が認められた。しかしながらこの時、蛋白発現に依存したチロジナーゼ活性の亢進は認められず、ET-1はチロジナーゼ発現を増強しても活性化作用は無いものと思われる。従って、チロジナーゼの活性化機構が別に存在することが推察できた。次にこのチロジナーゼ蛋白のET-1による発現調節機構を検討するために、ET-1受容体特異拮抗薬BQ123とETb受容体特異拮抗薬RES701-1を色素細胞の培養倍地中に添加した際のチロジナーゼ蛋白誘導に及ぼす影響を検討した。その結果、いずれの拮抗薬もチロジナーゼ活性はに影響しなかった。しかし、チロジナーゼ蛋白発現はBQ123によって阻害されたが、RES701-1によっては阻害を受けなかった。以上の事から、ET-1による色素細胞内チロジナーゼ蛋白発現機構にはER-1受容体が深く関わっていることが明確になった。

由于发现ET-1受体在色素细胞中大量存在，并且ET-1参与了酪氨酸酶介导的黑色素生产机制，因此已经研究了色素化机制与ET-1之间的关系。然而，关于产生ET-1的细胞有许多未知，会影响色素细胞。 Lnoue等。报告了影响色素细胞的ET-1来源在分化诱导后可能来自表皮细胞的可能性，但尚未报道与色素细胞的相互作用。因此，我们试图使用ET-1使用ET-1使用第一部分中建立的酪氨酸酶EIA系统在培养的色素细胞中调节酪氨酸酶表达的机制。结果，当将ET-1共存在培养基中并培养色素细胞中时，色素细胞的增殖会根据培养第四天后添加的ET-1浓度而增加。因此，将融合的色素细胞用含有1-100 NMET-1的培养基培养，该培养基清楚地增强了色素细胞的增殖，当检查了酪蛋白酶蛋白在色素细胞中的表达时，观察到ET-1浓度依赖性剂量依赖于酪蛋白蛋白蛋白表达的剂量。但是，目前，未观察到酪氨酸酶活性取决于蛋白质的表达，并且似乎ET-1也没有激活作用，即使它增强了酪氨酸酶的表达。因此，有可能推断出存在单独的酪氨酸酶激活机理。接下来，为了通过ET-1研究这种酪氨酸酶蛋白的表达调节机制，我们研究了ET-1受体特异性拮抗剂BQ123和ETB受体特异性拮抗剂RES701-1对酪蛋白蛋白诱导的作用。结果，没有任何拮抗剂影响酪氨酸酶活性。然而，BQ123抑制了酪氨酸酶蛋白的表达，但不抑制RES701-1。从上面可以清楚地看出，ER-1受体与ET-1的酪氨酸酶蛋白表达的机理深深涉及。