赤血球分化に関与するシグナル伝達分子の探索と機能解析

红系分化相关信号分子的搜寻及功能分析

基本信息

批准号：
10878131
负责人：
吉村昭彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は赤芽球様細胞ELM-1を用いてエリスロポエチン(EPO)による赤血球分化の研究を行っている。我々はEGF受容体とEPO受容体のキメラ分子を作成し、さら受容体のチロシン残基に変異を導入することで受容体細胞内ドメインの2つのチロシン残基(Y343、Y401)のいずれかが赤血球分化に必須であることを証明した。これら2つのチロシン残基はSTAT5の活性化に必要であり、STAT5と分化は密接に関連していることが考えられた。しかしながら一方IL3受容体やプロラクチン受容体とのキメラを作成して本細胞に導入したところこれらのキメラ分子はSTAT5を活性化するもののこの細胞の赤血球分化は誘導しないことを明らかにした。したがってIL3受容体になくEPO受容体に特異的な分化シグナルが存在し、STAT5とともに分化の促進に働くと考えられる。そしてそのシグナルの発生にはEPO受容体のY343、Y401のいずれかのりん酸化が必要であることが示唆される。この2つのりん酸化チロシン残基と会合する分子をクローニングするためりん酸化ペプチドによる精製を行った。アミノ酸配列決定の結果これらのペプチドにSTAT5とポスフォリパーゼCγ-2(PLC-γ-2)が会合することを明らかにした。PLC-γ-2の赤血球分化における役割を明らかにするために現在阻害剤やドミナントネガティブフォームを導入する実験を行っている。さらに酵母two-hybrid法による組織的スクリーニングを行うために、JAK2チロシンキナーゼを共発現させたスクリーニング系を開発した。これにエリスロポエチン受容体細胞ドメインをbaitとして様々なライブラリーをスクリーニングしたころフォスファチジル酸キナーゼのp55サブユニットなどが同定できた。新規分子も多数あり現在解析中である。

我们正在利用类红细胞ELM-1进行促红细胞生成素（EPO）诱导的红系分化的研究。我们创建了 EGF 受体和 EPO 受体的嵌合分子，并通过在受体的酪氨酸残基中引入突变，受体胞内结构域中的两个酪氨酸残基（Y343、Y401）中的任一个被证明对于红细胞分化。这两个酪氨酸残基是STAT5激活所必需的，表明STAT5与分化密切相关。然而，当我们创建具有IL3受体和催乳素受体的嵌合体并将其引入这些细胞中时，我们发现虽然这些嵌合分子激活了STAT5，但它们并没有诱导这些细胞的红系分化。因此，认为存在EPO受体特异的分化信号，但IL3受体不存在，并且与STAT5一起作用促进分化。这表明 EPO 受体 Y343 或 Y401 的磷酸化是产生该信号所必需的。为了克隆与这两个磷酸化酪氨酸残基相关的分子，我们使用磷酸化肽进行纯化。氨基酸测序显示 STAT5 和磷脂酶 Cγ-2 (PLC-γ-2) 与这些肽相关。为了阐明PLC-γ-2在红系分化中的作用，我们目前正在进行实验引入PLC-γ-2的抑制剂和显性失活形式。此外，为了使用酵母二杂交方法进行系统筛选，我们开发了共表达JAK2酪氨酸激酶的筛选系统。通过使用促红细胞生成素受体细胞结构域作为诱饵筛选各种文库，我们能够鉴定磷脂酰激酶的 p55 亚基。目前正在分析许多新分子。