生物多様性を保つヒト唾液タンパク質由来能動・受動免疫型歯周病予防ワクチンの開発

开发基于主动/被动免疫的牙周病预防疫苗，该疫苗源自人类唾液蛋白，可保护生物多样性

基本信息

批准号：
23390481
负责人：
片岡宏介
金额：
$ 7.57万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-04-01 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の当初の検討課題は、歯周病原菌と特異結合するヒト唾液タンパク質スタセリンおよびプロリンリッチプロテイン(PRP)上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチドに対する、唾液IgA抗体による歯周病原菌の付着阻害効果をin vitroで検討することであった。1)まず、スタセリンおよびPRP上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチド(Stat23およびPRP21)を作製・精製し、キャリアータンパク(KLH)に結合させ(多価)ペプチド複合体を作製すること。2)それらペプチド複合体を抗原とし、粘膜アジュバント(コレラトキシン(CT)、CpGオリゴDNA、Flt3L遺伝子配列をコードしたタンパク質発現DNAプラスミド)とともにマウスに経鼻投与し、唾液中に誘導される抗ペプチドIgA抗体を精製すること。3)その精製IgA抗体をインヒビターとして用い、それによる歯周病原菌の付着・定着阻害能を口腔内歯面モデルにて検討すること。であった。結果は、1)ペプチド合成をFmoc法により作製を試みたが、経済的、技術的な面で当初の作製予定量が確保できないと予想され、専門業者に外部注文した。2)2種の抗原および3種の粘膜アジュバントを組み合わせ、マウスに経鼻投与した。抗原特異的IgA応答を認めたものは、PRP21抗原のみであった。そのPRP21抗原に対する唾液IgA抗体の産生量について、最も効果の高い粘膜アジュバントは、CTであった。以後CTとPRP21を経鼻同時投与し、抗PRP21特異的唾液IgA抗体を精製し、約150匹のマウスから精製IgA抗体24.3mgが精製された。3)その精製IgA抗体溶液100μg/ml 100μLによるPRP被覆ハイドロキシアパタイトビーズへの歯周病原菌(P.gingivalis ATCC 33277)の付着阻害実験を行ったところ、最大97.7%の付着阻害が認められた。

今年最初的研究课题是评估唾液IgA抗体抑制牙周病原菌与人类唾液蛋白stasselin和富含脯氨酸蛋白（PRP）上含有最小结合位点氨基酸序列的肽粘附的效果，与牙周病原体的结合需要在体外进行研究。 1) 首先，生产并纯化含有 stasselin 和 PRP 上最小结合位点氨基酸序列的肽（Stat23 和 PRP21），然后与载体蛋白（KLH）结合以创建（多价）肽复合物。 2)当这些肽复合物用作抗原并与粘膜佐剂（霍乱毒素（CT）、CpG寡DNA、编码Flt3L基因序列的蛋白质表达DNA质粒）一起经鼻给予小鼠时，在唾液中诱导抗肽纯化。 IgA 抗体。 3) 使用纯化的IgA抗体作为抑制剂，在口腔内牙齿表面模型中检测其抑制牙周病原体粘附和定植的能力。是的。结果如下： 1）我们尝试用Fmoc法合成该肽，但预计由于经济和技术原因，我们将无法保证原计划的生产量，因此我们向专家订购公司。 2)将两种抗原和三种粘膜佐剂的组合经鼻给予小鼠。仅针对 PRP21 抗原观察到抗原特异性 IgA 反应。就针对 PRP21 抗原的唾液 IgA 抗体产生而言，CT 是最有效的粘膜佐剂。然后，同时经鼻给予CT和PRP21，纯化抗PRP21特异性唾液IgA抗体，从约150只小鼠中纯化出24.3mg纯化的IgA抗体。 3) 使用100 μL 100 μg/ml的纯化IgA抗体溶液进行抑制牙周病原菌（P.gingivalis ATCC 33277）与PRP包被的羟基磷灰石珠的粘附的实验时，粘附抑制率最高为97.7%被观察到。