歯周病原性菌の定着を促す唾液タンパク質遺伝子を導入した歯周病惹起動物モデルの作製

创建包含促进牙周病原菌定植的唾液蛋白基因的牙周病诱发动物模型

基本信息

批准号：
11771315
负责人：
片岡宏介
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

有力な歯周病原性細菌と考えられているPorphyromonas gingivalisは、グラム陽性菌との共凝集や唾液ペリクル構成成分との特異的結合により口腔表面に付着・定着する。我々は、これまでに、P.gingivalisの主たる付着因子である線毛は唾液ペリクル中の唾液タンパク質成分であるproline-rich protein1と特異的に結合すること、さらに、同タンパタ質のカルボキシル末端部分におけるペプチド(pPRP-C)領域において、強く結合することを報告した。本研究では、pPRP-C遺伝子(prp-c)を合成オリゴヌクレオチドから作製し、pPRP-Cを分泌するようにStreptococcus gordoniiを形質転換した。そして、このリコンビナントS.gordoniiの培養上清を用いて、in vitroでのP.gingivalis繊毛と唾液ペリクルとの結合阻害実験を行った結果、本結合を阻害した。また、この培養上清はP.gingivalisと数種の口腔レンサ球菌株との共凝集をも抑制することを明らかにしてきた。この結果を応用し、NIH3T3 fibroblast表面上にpPRP-Cを発現させる目的で、prp-cの5'-にPst Iサイト、3'-にSma Iサイトを付与しprp-cフラグメントを作製、哺乳類細胞発現ベクターに挿入しpPRP-C発現プラスミドを構築した。このプラスミドをfibroblastに導入し免疫組織染色法により発現の確認を行っているが、このシステムを用いることにより、これまで作製不可能であったP.gingivalisの定着・感染による歯周病惹起動物モデル作製の可能性が考えられる。

牙龈卟啉单胞菌被认为是一种有效的牙周病原体，通过与革兰氏阳性菌共聚集并与唾液膜成分特异性结合，粘附并定植于口腔表面。我们之前已经证明，牙龈卟啉单胞菌的主要粘附素菌毛与富含脯氨酸的蛋白1（唾液膜中的唾液蛋白成分）特异性结合，据报道，在肽（pPRP-C）中观察到强结合。）地区。在本研究中，我们从合成寡核苷酸构建了 pPRP-C 基因（prp-c），并转化戈登链球菌以分泌 pPRP-C。利用该重组戈登沙门氏菌培养上清液，进行了牙龈卟啉单胞菌纤毛与唾液膜的体外结合抑制实验，结果发现该结合受到抑制。研究还表明，该培养物上清液可抑制牙龈卟啉单胞菌和几种口腔链球菌菌株的共聚集。应用该结果，为了在NIH3T3成纤维细胞表面表达pPRP-C，通过在prp-c的5'位置添加Pst I位点和在3'位置添加Sma I位点来创建prp-c片段。 -位置，并且通过将其插入细胞表达载体来构建pPRP-C表达质粒。将该质粒引入成纤维细胞中，并通过免疫组织学染色证实其表达，通过使用该系统，我们能够创建由牙龈卟啉单胞菌定植和感染引起的牙周病诱发微生物的模型，这在以前是不可能创建的。是一种捏造的可能性。