乳児重症ミオクロニーてんかんにおける変異イオンチャネル蓄積病態の実証

婴儿严重肌阵挛性癫痫突变离子通道积累病理学的论证

基本信息

批准号：
19659272
负责人：
廣瀬伸一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Fukuoka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19659272/
关键词：
チャネル受容体てんかん中枢神経遺伝子

项目摘要

乳児重症ミオクロニーてんかん(SMEI)などの重症てんかんに変異イオンチャネル蓄積病態が関係していることを以下方法であきらかにした。まず、細胞生物学的に変異GABA_A受容体やNa+チャネルの細胞局在、小胞体(ER)輸送障害とERストレス・アポトーシスを検証した。ラットGABRG2に蛍光蛋白標識し、ヒトSMEIの変異とGEFS+の変異を導入し、培養細胞上に発現させ、α1β 2γ2よりなる5量体のGABA_A受容体を再構成させた。この細胞を用いて変異GABA_A受容体標識蛍光蛋白を指標に、免疫染色とともに蛍光顕微鏡を用いる方法、共焦点レーザー顕微鏡による方法、さらに、GABAA受容体にある糖鎖を利用しパルスチェイスにてその細胞内局在を調査した。これらの実験により変異を導入したGABA_A受容体のオルガネラ局在が小胞体であることが明らかになった。この細胞を用いてERストレスによる小胞体やアポトーシス関連分子の同定を行った。今回はカスパーゼ、DNAフラグメンテーション、アネキシンV、抗PARP等の複数の指標の応用によりアポトーシスの証明を行った。これによりGABAA受容体を発現させた、培養細胞での変異アポトーシスが実証された。さらに分子病態をin vivoで明らかにするため、ヒトてんかんで発見された遺伝子変異と相同変異を持つ動物の作出を試みた。このためヒトと同じ遺伝子異常を持つモデル動物をすでに実績のあるPDGFプロモーターを用いた組換え法により遺伝子組換えラットで作成した。今回はヒト家族性特発性てんかん(常染色体優性夜間前頭葉てんかん)と同じ遺伝子異常をCHRNA4遺伝子に持つ遺伝子組換えラットを作出することに成功した。(特許取得済、J.Neuroscience 2008)

通过以下方法阐明了以下方法，即突变体离子累积病理与严重癫痫（SMEI）有关，例如我的克洛尼癫痫（SMEI）。首先，验证了细胞生物学GABA_A受体和Na+通道细胞，ER应激 - 凋亡和ER应激凋亡。在大鼠Gabbrg2中标记了荧光蛋白标志，引入了人类SMEI突变和GEFS+突变，并在培养细胞上表达，并重建了5 -Amount的GABA_A受体，该受体超过α1β2γ2。使用这些细胞，将突变的GABA_A受体标记标记的荧光蛋白用作指标，如何使用荧光显微镜以及免疫电脑，使用CO -COCUS激光显微镜的方法，而GABAA受体中的细胞链中的细胞链中的细胞中的细胞则是PULSTEYS中的细胞。这些实验表明，引入突变的GABA_A受体中的有机埃拉是一个音节。使用这些细胞，确定了ER应力的音节和凋亡相关的分子。这次，我们通过应用多个指标，例如Casperase，DNA标志维持，Anneexin V和抗PARP证明了凋亡。结果，证明了表达GABAA受体的培养细胞中突变凋亡。为了阐明体内的分子病理，我们试图创建具有遗传突变和人类癫痫中同源突变的动物。因此，使用已经具有可靠的往绩记录的PDGF启动子，通过重组方法在转基因大鼠中创建了具有相同基因异常的模型动物。这次，我们成功地创建了与人类家族的基因异常相同的遗传重组大鼠，在CHRNA4基因中的特定特异性癫痫（正常染色体染色体的lape癫痫）。（获得专利，J.Neurosciencienciencienciencience 2008）

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

変異導入遺伝子およびそれを導入したノックイン非ヒト動物

引入突变转基因和敲入非人类动物

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Mutation screening of AP3M2 in Japanese epilepsy patients

DOI：
10.1016/j.braindev.2006.12.004
发表时间：
2007-09-01
期刊：
BRAIN & DEVELOPMENT
影响因子：
1.7
作者：
Huang, Ming-Chih;Okada, Motohiro;Kojima, Toshio
通讯作者：
Kojima, Toshio

Hemiconvulsion-hemiplegia syndrome in a patient with severe myoclonic enilensv in infancy

婴儿期严重肌阵挛性老年性偏侧惊厥偏瘫综合征一例

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
Epilepsia 50(9)
影响因子：
0
作者：
Hirose S.;et al.
通讯作者：
et al.

Midazolam for the treatment of neonatal electroencephalography-confirmed seizures

咪达唑仑治疗新生儿脑电图确诊的癫痫发作

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Med. Bull. Fukuoka Univ. 34(4)
影响因子：
0
作者：
Ogawa A.;Shirotani G;Hashimoto J;Hayashi H;Ninomiya S;Ohta;E.;Kinoshita R. M;T.;Hirose S.
通讯作者：
Hirose S.

Deletions involving both KCNQ2 and CHRNA4 present with benign familial neonatal seizures

DOI：
10.1212/wnl.0b013e3181bc0158
发表时间：
2009-10-13
期刊：
NEUROLOGY
影响因子：
9.9
作者：
Kurahashi, H.;Wang, J. -W.;Hirose, S.
通讯作者：
Hirose, S.

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通讯作者：
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