癌細胞の浸潤と転移における、新規Dishevelled関連蛋白GCF2の機能解析

新型Dishevelled相关蛋白GCF2在癌细胞侵袭和转移中的功能分析

基本信息

批准号：
19890020
负责人：
大塚英郎
金额：
$ 1.97万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19890020/
关键词：
GCF2 LRRFIP1 PhoA disheveled

项目摘要

本研究の目的は、新規dishevelled関連タンパクGCF2/LRRFIP1のRhoを介した細胞骨格、特に癌細胞の運動における働きのメカニズム、または、インテグリン等を介した細胞一細胞外基質の接着における働きを培養細胞をもちいた実験系で明らかにするとともに、癌の浸潤、転移におけるGCF2/LRRFIP1の関与の有無について動物実験モデルを使用して、明らかにすることにある。上記目的達成のため、初年度は下記の研究成果をあげた。1)GCF2安定強発現癌細胞株、および安定発現抑制癌細胞株の作成GCF2発現プラスミドベクター、およびGCF2発現抑制SiRNA発現ベクターを大腸癌、乳癌、膵癌などの高転移癌腫の細胞株に導入。G418選択培地により、安定発現株および安定発現抑制株を作製した。2)GCF2蛋白質のN末端のアミノ酸配列をBaitとしてYeast two hybridを行った。データベース検索により、GCF2のアミノ酸配列は、脊椎動物において広く保存され、ゼブラフィッシュにおいても高い相同性を有する遺伝子が認められるなど、機能的にきわめて重要な働きをしていると予測される。しかしながら、そのアミノ酸配列は、他の蛋白質と相同性に乏しく、既知のドメイン構造を有しない。他方、GCF2とdishevelledとの相互作用を検討する中で、我々はGCF2のアミノ酸配列中で、N末端付近にセリンを豊富に含む領域を見いだし、さらに同部位がdishevelledと結合することを見いだした。そこで、同部分をbaitとしてyeast-two-hybridをおこない、GCF2と相互作用を有する新たな分子を検索、GCF2がどのような蛋白質群の中で機能するのかについて検討した。現在、陽性コロニーの解析を行なっている。

本研究的目的是探讨新型蓬乱相关蛋白GCF2/LRRFIP1在Rho介导的细胞骨架中的功能机制，特别是癌细胞运动性，或整合素介导的细胞-细胞外基质粘附在培养细胞中的作用。除了使用动物模型的实验系统阐明GCF2/LRRFIP1在癌症侵袭和转移中的参与之外，我们的目标是阐明GCF2/LRRFIP1在癌症侵袭和转移中的参与。为了实现上述目标，第一年取得了以下研究成果。 1) 建立稳定强表达GCF2的癌细胞系和稳定抑制表达的癌细胞系将GCF2表达质粒载体和抑制GCF2表达的SiRNA表达载体导入结直肠癌、乳腺癌和胰腺癌等高度转移癌的细胞系中癌症。使用G418选择培养基产生稳定表达菌株和稳定表达抑制菌株。 2)以GCF2蛋白的N端氨基酸序列为诱饵进行酵母二杂交。数据库检索发现，GCF2的氨基酸序列在脊椎动物中广泛保守，并且在斑马鱼中发现了高度同源性的基因，表明其在功能上发挥着极其重要的作用。然而，其氨基酸序列与其他蛋白质几乎没有同源性，并且没有已知的结构域结构。另一方面，在研究GCF2与dishevelled之间的相互作用时，我们在GCF2的氨基酸序列中N末端附近发现了一个富含丝氨酸的区域，并进一步发现该区域与dishevelled结合。因此，我们使用相同区域作为诱饵进行酵母双杂交，寻找与GCF2相互作用的新分子，并研究GCF2在哪种蛋白质组中发挥作用。我们目前正在分析阳性菌落。