ジーントラップ法による新しい造血関連遺伝子の同定

利用基因陷阱法鉴定新的造血相关基因

基本信息

批准号：
10181220
负责人：
中熊秀喜
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10181220/
关键词：
造血関連遺伝子ジーントラップ巨核球

项目摘要

ジーントラップ法を応用し、造血現象に関わる新規遺伝子の同定、発現や機能の解析を試みた。まず、ジーントラップベクターを導入したマウス胚幹細胞(ES細胞)とOP9ストローマ細胞を用いた培養系で造血発生を再現し、造血関連遺伝子と融合したレポーター遺伝子を発現する4個のESクローンを得た。このうち2個のクローン(12G10,4H5)より作成したヘテロマウスでは胎児肝や骨髄などにレポーター遺伝子の発現を認め、OP9ストローマ細胞を用いたin vitro実験結果を支持した。またコロニー解析ではCFU-mixや巨核球などにレポーターの発現が確認された。これら2個の遺伝子の塩基配列を決定したところ、4H5はC2H2タイプのzinc fingerコンセンサスをコードし、12G10は全く未知の遺伝子であった。続いてこの2つの遺伝子の生理機能を知る目的でヘテロマウスの掛け合わせによってホモマウスを作成した。これらのマウスは正常に生まれ発育しwi1d typeと比べ血液学的にも表現型に顕著な違いはなかった。一方、ヒトの血液株細胞にはこれらマウスで得られたcDNAプローブで検出されるRNAが存在していた。たとえば、マウスの巨核球に強く発現する4H5は、ヒト巨核球系の株細胞にも強く発現しており、種を超えて機能していることを示唆していた。現在、4H5のヒトホモログをクローン化し、ゲノム上の位置を解析中である。

应用基因陷阱方法，我们试图鉴定参与造血的新基因并分析它们的表达和功能。首先，我们使用引入基因捕获载体和OP9基质细胞的小鼠胚胎干细胞（ES细胞）在培养系统中再现造血发育，并获得了表达与造血相关基因融合的报告基因的四个ES克隆。在由其中两个克隆（12G10、4H5）创建的杂合小鼠中，在胎儿肝脏和骨髓中观察到报告基因表达，支持使用 OP9 基质细胞进行的体外实验的结果。此外，集落分析证实了报告基因在 CFU-mix 和巨核细胞中的表达。当确定这两个基因的碱基序列时，4H5编码C2H2型锌指共有序列，而12G10是完全未知的基因。接下来，为了了解这两个基因的生理功能，我们通过杂合子小鼠杂交产生了纯合子小鼠。这些小鼠出生和发育正常，与野生型相比没有显着的血液学或表型差异。另一方面，人类血系细胞含有 RNA，可以使用从这些小鼠获得的 cDNA 探针进行检测。例如，在小鼠巨核细胞中强烈表达的4H5在人类巨核细胞系中也强烈表达，这表明它在跨物种中发挥作用。我们目前正在克隆 4H5 的人类同源物并分析其在基因组上的位置。