魚類の初期生残戦略におけるインスリン様シグナルの新しい意義

类胰岛素信号在鱼类早期生存策略中的新意义

• 批准号: 07J06747
• 负责人: 金子 元
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J06747/
• 关键词: インスリン様シグナル; 初期生残率; メダカ; 初代培養; PI3-キナーゼ; Akt; ストレスタンパク質; Foxo1

魚類の個体数はときに数百倍の規模で変動し、食料問題などを通じて人類の生活に大きな影響を及ぼす。魚類の個体数は初期生残率とよく相関するため、初期生残率を左右すると考えられる水温や捕食者密度などが様々な海域で測定されている。一方、稚仔魚のストレス耐性や成長速度も初期生残率に影響を及ぼすと考えられる。ストレス耐性や成長速度はインスリン様シグナル伝達経路で制御されることが複数の魚種で示されているが、魚類では本経路に関する知見が非常に少ない。そこで本研究では、プロテオミクス的手法を用いてインスリン様シグナル伝達経路の主要な構成因子を同定し、本経路とストレス耐性および成長速度との関連を明らかにすることを目的とする。本年度は、メダカでインスリン様シグナルを解析する実験系を立ち上げた。まず、メダカ胚(受精後約5日)から繊維芽細胞を初代培養し、培養、継代および凍結などの基本操作を常法に従って行えることを確認した。次に、この細胞から調製した細胞抽出液を用いて、哺乳類の市販抗体がメダカの相同分子を認識するかどうかを調べた。その結果、PI-3キナーゼp85サブユニット、Akt,pAkt substrateなどのインスリン様シグナル伝達経路の各分子、HSP60およびHSP70といったストレスタンパク質、さらにアクチンやEF-1αなどの内部標準タンパク質の抗体が使用可能であることが明らかとなった。また、ゲノムおよびESTデータベースを用いてキナーゼアッセイに用いる予定のAktおよびFoxo1をinsilicoクローニングした。今後はこれらのcDNAをクローニングし、発現系を構築する予定である。

鱼的种群有时会波动数百次，并且通过食物问题和其他问题对人类生活产生了重大影响。由于鱼类种群的数量与初始生存率和捕食者密度良好相关，因此被认为会影响初始生存率的捕食者密度。另一方面，幼鱼的胁迫耐受性和生长速率也被认为会影响初始生存率。尽管有几种鱼类表明，应激耐受性和生长速率受胰岛素样信号通路的调节，但对鱼类中这种途径的了解很少。因此，本研究旨在使用蛋白质组学技术来确定胰岛素样信号通路的主要成分，并阐明该途径与应激耐受性和生长速率之间的关联。今年，我们启动了一个实验系统，用于分析Medaka中的胰岛素样信号。首先，已经证实成纤维细胞是从Medaka胚胎（施肥后5天）培养的，并且可以根据常规方法进行培养，通道和冻结等基本程序。接下来，使用这些细胞制备的细胞提取物来确定哺乳动物商业抗体是否识别同源Medaka分子。结果，已经揭示了抗体可以与诸如PI-3激酶p85亚基，胰岛素样信号途径（如AKT和PAKT底物）的分子，诸如PI-3激酶p85亚基，HSP60和HSP60和HSP70等应激蛋白，以及诸如pactin actin actin pactin和ef-1α之类的内标准蛋白。此外，使用基因组和EST数据库克隆了在激酶测定中使用的AKT和FOXO1。将来，这些cDNA将被克隆，并将构建一个表达系统。

项目成果

Reduction of insulin receptor substrate(IRS)-1 is required for induction of C/EBPα expression during adipogenesis of 3T3-L1 cells

3T3-L1 细胞脂肪生成过程中，诱导 C/EBPα 表达需要减少胰岛素受体底物 (IRS)-1

• 发表时间: 2007
• 作者: Yoon SH;Itoh Y;Kaneko G;Nakaniwa M;Ohta M;Watabe S.;長谷川 高士,渡辺 陽子,豊島 由香,金子 元,柴田 倫宏,浅野 知一郎,伯野 史彦,高橋 伸一郎
• 通讯作者: 長谷川 高士,渡辺 陽子,豊島 由香,金子 元,柴田 倫宏,浅野 知一郎,伯野 史彦,高橋 伸一郎

Changes of IGF signals during myogenic differentiation which are quite different from those during adipogenic differentiation

成肌分化过程中IGF信号的变化与成脂分化过程有很大不同

• 发表时间: 2007
• 作者: Hashiguchi-Kato;R. et al.;Gen Kaneko
• 通讯作者: Gen Kaneko

Molecular characterization of Japanese sillago vitellogenin and changes in its expression levels on exposure to 17β-estradiol and 4-tert-octylphenol

日本 silago 卵黄蛋白原的分子特征及其暴露于 17β-雌二醇和 4-叔辛基苯酚后表达水平的变化

• 发表时间: 2008
• 期刊: Mar.Biotechnol 10
• 作者: Yoon SH;Itoh Y;Kaneko G;Nakaniwa M;Ohta M;Watabe S.
• 通讯作者: Watabe S.