小胞輸送関連分子STAMs/Hrsの抗原提示における役割の解析

囊泡转运相关分子STAMs/Hrs在抗原呈递中的作用分析

• 批准号: 06J52072
• 负责人: 玉井 恵一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J52072/
• 关键词: 樹状細胞; Hrs; STAM; 抗原提示

STAM/Hrsの抗原提示における役割を明らかにするために,まず細胞株DC2.4にレトロウイルスベクターを用いてHrsに対するshRNA発現ベクターを導入し,Hrs knock down細胞株を樹立した。この細胞株は、LPSおよびOVA刺激において細胞表面のMHC classII, CD40,CD80といった活性化マーカーが有意に上昇する事が明らかとなった。また、抗原刺激に対するサイトカイン(IL-6,TNF-α)産生量も有意に増大する事がわかった。BSA, OVAの分解効率はHrsの有無にかかわらず同じであった。細胞表面に表出しているMHC-class II,CD40,CD80は、Hrs knock down細胞にて多い傾向にあるが,細胞内も含めたMHC-class IIの総量はHrsの有無に関わらず同じであった。以上の事より、Hrs knock downによる抗原提示能の賦活化は,MHCが細胞内から細胞表面へ輸送される部分の以上である事が示唆された。続いて,Hrsのin vivoにおける役割を明らかにするため,Hrs conditional knock out mouseを作成した.驚くべきことに,中枢神経でノックアウトしたマウスにおいて,海馬錐体細胞が脱落することが明らかとなった.詳細に観察すると,脱落する錐体細胞にはユビキチンかタンパクが蓄積しており,その中にはオートファジー特異的に分解されるタンパクであるp62も含まれていた.このマウスは記憶障害の他に活動性の低下も見られ,海馬以外にも神経系機能の低下があることが示唆された.以上のことからHrsは海馬錐体細胞の膜輸送に必須であり,錐体細胞の生存にはHrsを含むオートファジー経路が重要であることが示唆された.

为了阐明STAM/Hrs在抗原呈递中的作用，我们首先使用逆转录病毒载体将Hrs的shRNA表达载体引入DC2.4细胞系，并建立Hrs敲低细胞系。结果表明，该细胞系细胞表面的 MHC II 类、CD40 和 CD80 等激活标志物在 LPS 和 OVA 刺激后显着增加。还发现，响应抗原刺激的细胞因子（IL-6、TNF-α）的产生显着增加。无论是否存在 Hrs，BSA 和 OVA 的降解效率都是相同的。 Hrs 敲低细胞中细胞表面表达的 MHC-II 类、CD40 和 CD80 往往很丰富，但无论是否存在 MHC-II 类，包括细胞内部的 MHC-II 类总量都是相同的。小时。由此可见，Hrs敲低对抗原呈递能力的激活不仅仅是将MHC从细胞内部转运到细胞表面。接下来，为了阐明 Hrs 在体内的作用，我们进行了 Hrs 条件敲除。令人惊讶的是，经过仔细观察，发现中枢神经系统被敲除的小鼠的海马锥体细胞会脱落，其中泛素或蛋白质会在脱落的锥体细胞中积聚。除了记忆障碍之外，该小鼠还表现出活性下降，这表明除海马体以外的区域的神经系统功能下降，包括 Hrs 在内的自噬途径对于 Hrs 的膜转运至关重要。 ，表明自噬途径（包括 Hrs）对于锥体细胞的存活很重要。