ブタ遺伝資源の保全のための体外胚生産システムの確立

建立猪遗传资源体外胚胎生产体系

基本信息

批准号：
06F05648
负责人：
菊地和弘
金额：
$ 0.96万
依托单位：
National Institute of Agrobiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ブタ体外胚生産システムの確立として、主に次の1)〜3)の研究を行った。1)SSV(Solid Surface vitrification)による成熟卵の超急速凍結(ガラス化)保存:成熟卵の凍結保存法の可能性について検討を行った。従来法を改良したところ、50%以上の生存率が得られたが、ガラス化により卵のグルタチオン量が低減し抗酸化能が低下することが示唆された。また、ガラス化・加温後の卵に活性化刺激を与えると、活性化されやすいことが判明した。超急速凍結により卵の生存性の低下と、受精後の発生能の低下が示唆される。2)多精子受精胚の発生能に関する研究:体外生産胚の効率的生産をめざし、細胞の倍数性と発生能の関連について検討した。単精子受精と多精子受精を遠心処理後の前核数により分別した(それぞれ、2PNならびにPPNに分類した)。2PN胚ならびにPPN胚の発生を調べたところ、卵割率ならびに胚盤胞発生率に有意差が認められた(2PN>PPN)が、胚盤胞の総細胞数には差がなかった。染色体解析結果からPPNにおいても正常2倍体胚へと発生するものが多数あることが示された。ブタ胚においては、体内受精においても多精子侵入が起こることが示されている。受精・発生過程において倍数性が修正され、多精子受精でもある程度正常な胚発生が進展することが示唆された。3)減数分裂静止に関する研究:卵核胞期からの減数分裂の再開は卵の成熟・受精・胚発生に重要な役割を担う。成熟培養時にサイトカラシンBによりアクチン線維の重合を阻止したところ、相同染色体の分離が行われるが第一極体が放出されないので2倍体の卵が作出される。この卵に活性化処理を行うと前核が形成され発生が進展するが、その際極体中に姉妹染色分体を放出した2倍体胚が得られる。通常の単為発生卵作製(相同染色体は第一極体中に放出される)と異なり、本手法で得られる単為発生胚は相同な遺伝子対を含むため、ドナー(供卵動物)と同じ遺伝子情報を有するクローン胚を作出する技術として注目される。

为了建立猪体外胚胎生产系统，我们主要进行了以下1）至3）方面的研究。 1) 使用 SSV（固体表面玻璃化）超快速冷冻（玻璃化）保存成熟卵：我们研究了冷冻保存成熟卵的可能性。当改进传统方法时，获得了50%以上的成活率，但有人认为，玻璃化冷冻会减少鸡蛋中谷胱甘肽的含量，并降低其抗氧化能力。此外，还发现，当对玻璃化和加热后的鸡蛋施加激活刺激时，它们更有可能被激活。超快速冷冻表明卵子活力下降，受精后发育潜力下降。 2）多精受精胚胎发育潜力研究：以体外受精胚胎的高效生产为目标，研究细胞倍性与发育潜力的关系。根据离心后原核的数量将单精子受精和多精子受精分类（分别分为2PN和PPN）。当我们调查2PN和PPN胚胎的发育时，我们发现卵裂率和囊胚发育率有显着差异（2PN>PPN），但囊胚细胞总数没有差异。染色体分析结果表明，许多PPN发育成正常的二倍体胚胎。在猪胚胎中，研究表明多精入侵也发生在体内受精过程中。有人认为，倍性在受精和发育过程中得到纠正，即使在多精受精中，正常的胚胎发育也会在一定程度上得到进展。 3）减数分裂停滞研究：卵泡阶段减数分裂的恢复对于卵子成熟、受精和胚胎发育具有重要作用。当在成熟培养过程中用细胞松弛素 B 阻断肌动蛋白纤维的聚合时，同源染色体分离，但第一极体不会释放，从而产生二倍体卵。当这个卵子被激活时，原核形成并继续发育，形成二倍体胚胎，其中姐妹染色单体被释放到极体中。与正常的孤雌生殖卵子生产（同源染色体被释放到第一极体）不同，使用这种方法获得的孤雌生殖胚胎含有同源基因对，因此与供体动物相同，作为创建具有遗传基因的克隆胚胎的技术而受到关注。信息。