ブタ遺伝資源の保全のための体外胚生産システムの確立

建立猪遗传资源体外胚胎生产体系

• 批准号: 05F05648
• 负责人: 菊地 和弘
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05F05648/
• 关键词: ブタ; 体外受精; 凍結保存; 染色体解析; 単為発生; サイトカラシンB

本研究では、1)多精子受精卵の発生能の解析と、多精子受精を回避する顕微授精法の確立、2)体外生産胚ならびに顕微授精胚のための培養システムの改良、および3)体外生産胚ならびに顕微授精胚の凍結保存技術の改良を行う計画をたてた。1)と3)については以下の結果を得た。なお、2)については現在実験を継続している段階にある。1)ブタ体外受精では、多精子侵入による受精の成立が胚における倍数性の異常を引き起こす最大の要因となっている。本細部課題では、ブタ卵子が多精子受精を排除・許容する生理学的機構の解明、ならびにそれらが初期胚にまで発生する機構について研究を実行している。多精子侵入のほか、未成熟卵への精子侵入による受精の成立も胚の倍数性異常を引き起こす一要因である。この場合、受精が成立すると初期発生も進行するが、胚盤胞への発生率が低く品質も劣ることを見いだした。なお、染色体解析の結果、倍数性に異常が認められた(Somfai et al.,2005)。3)体外成熟卵の凍結保存法として、ガラス化冷却(超急速凍結)を行った。Solid Surface Vitrification (SSV)法を用いて冷却を行い、加温後、単為発生刺激を加え体外培養を行った結果、胚盤胞まで発育させることができた(Somfai et al.,2006)。また、本細胞課題では、細胞骨格安定剤による前処理法の確立を目指すが、その前段階として、細胞骨格安定剤の1つであるサイトカラシンBが、卵子の成熟・受精・発生にどのように影響を及ぼすかの確認を行った。その結果、第一極体の放出を押さえ二倍体化を引き起こし、活性化刺激を与えると単為発生が誘起され胚盤胞にまで発生することを明らかにした。したがって、受精後は倍数性異常を起こす可能性が示唆される。本研究成果は現在、Reproductionに投稿中である。

在这项研究中，我们计划1）分析多个卵子卵子的发育潜力，建立一种静脉内方法以避免多植物施肥，2）改善静脉内产生的胚胎和静脉内产生的胚胎的培养系统，以及3）改善生产胚胎的冷冻保存技术，并改善了生产的胚胎。获得以下结果为1）和3）。关于2），目前正在进行实验。 1）在体外受精的猪中，由于多体植物的侵袭而建立受精是导致胚胎倍倍异常的最大因素。在此详细的讨论中，我们正在研究消除猪卵并允许多体植物受精的生理机制，以及它们在早期胚胎中的发生方式。除多个多体侵入外，由精子侵入未成熟卵引起的受精也是引起胚胎异常异常的因素。在这种情况下，当受精时初始发育会进展，但是发现胚泡的发病率很低，质量很差。此外，染色体分析表明倍性异常（Somfai等，2005）。 3）进行玻璃化和冷却（超快速冷冻）作为一种冷冻水平的体外成熟卵的方法。使用固体表面玻璃（SSV）方法冷却混合物，然后加热，然后将单毒性刺激添加到体外培养中，从而导致胚泡的发展（Somfai等，2006）。此外，在这一细胞挑战中，我们旨在建立一种用细胞骨架稳定剂建立预处理方法，但是作为初步步骤，我们确认了细胞切拉蛋白B（细胞骨架稳定剂之一）如何影响卵的成熟，肥料和发育。结果，揭示了抑制第一根极的释放并进行二倍化时，并且在应用激活刺激时，诱导了骨生成，甚至发生了胚泡。因此，建议在受精后可能发生倍增异常。目前，这项研究的结果正在发布有关。