MAPKホスファターゼによるタイト結合蛋白発現制御と炎症性腸疾患に対する効果

MAPK磷酸酶对紧密连接蛋白表达的调节及其对炎症性肠病的影响

• 批准号: 17790459
• 负责人: 大島 忠之
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hyogo Medical University (2006)Nagoya City University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790459/
• 关键词: 炎症性腸疾患; MAPKホスファターゼ; タイト結合; クローディング; 内科; シグナル伝達; 遺伝子; 生体分子

本研究では,MAPキナーゼを制御するMAPキナーゼフォスファターゼによるタイトジャンクション蛋白発現制御をin vitroで検討し,in vivoでは腸炎抑制効果を検討することを目的とした.1.組換えアデノウイルスを用いたin vitroでの検討MKP(1,3,7)とWip-1のそれぞれを発現する組換えアデノウイルスを大腸上皮細胞に前投与し,過酸化水素刺激(500μM)下での,クローディン(1,2,3,4,7)の発現変化をWestern blotting, real time PCR,免疫蛍光染色を用いて検討した.Wip-1蛋白の発現確認は,抗Flag抗体を用いてWestern blottingで確認した.またこれら感染細胞で過酸化水素刺激による大腸上皮粘膜透過性の上昇(電気抵抗値の低下,FITC dextranの透過性上昇)は抑制された.Wip-1発現により過酸化水素刺激によるクローディン-4の局在変化は抑制された.MKP発現アデノウイルスでは明らかな変化はみられなかった.Wip1が過酸化水素刺激による大腸粘膜透過性上昇を抑制することが明らかとなった.またこの機序にタイトジャンクション蛋白:クローディン-4が重要であることが明らかとなった.2.MKP発現組換えアデノウイルスを用いた腸炎抑制効果の検討これらアデノウイルスの効果をin vivoで検討するため4%DSSをC57BL/6J-664マウスに7日間自由引水させることによりDSS腸炎マウスモデルを作成した.In vivoでの検討を行うため,Wip1発現アデノウイルスを調整した.作成したアデノウイルスの効果を検討するために,種々の濃度で経肛門的に投与し,便性状,貧血,体重,大腸長,大腸重量,大腸組織内myeroperoxidase(MPO)活性あるいは病理組織学的変化の検証を試みた.これまでのところWip-1発現アデノウイルスによる腸炎抑制効果は明らかでない.今後は投与方法の工夫が必要であると考えている.

本研究在体外研究了控制MAP激酶的MAP激酶磷酸酶对紧密连接蛋白表达的调节作用，旨在研究其在体内的肠道炎症抑制作用。 1．体外研究将表达MKP(1,3,7)和Wip-1的重组腺病毒预先施用于结肠上皮细胞，并使用Western blotting研究claudin(1,1,2,3,4,7)表达变化，实时PCR和免疫荧光染色。使用抗Flag抗体通过Western blotting证实Wip-1蛋白的表达。此外，在这些受感染的细胞中，结肠上皮粘膜通透性增加（电阻降低，FITC）。 Wip-1 的通透性增加被抑制，过氧化氢刺激引起的claudin-4 的定位变化没有被观察到表达MKP 的腺病毒由于过氧化氢刺激而发生明显的变化。结果发现，紧密连接蛋白claudin-4 对于该机制很重要。 2. 使用表达MKP 的重组腺病毒抑制肠道炎症 检查这些腺病毒在肠道中的作用。为了进行体内研究，我们通过将 C57BL/6J-664 小鼠置于 4% DSS 中 7 天来创建 DSS 肠炎小鼠模型。为了进行体内研究，我们制备了表达 Wip1 的腺病毒。为了研究所创建的腺病毒的效果，我们以不同浓度口服给药，以确定粪便、贫血、体重、结肠长度和大肠的状况。结肠组织中的重量。我们试图验证过氧化物酶（MPO）活性或组织病理学变化，到目前为止，表达 Wip-1 的腺病毒对肠道炎症的抑制作用尚不清楚。