中枢ドーパミン系の破壊・移植に伴う行動及び細胞外ドーパミンとアミノ酸活性の変化

与中枢多巴胺系统的破坏和移植相关的行为以及细胞外多巴胺和氨基酸活性的变化

基本信息

批准号：
05770732
负责人：
石田康
金额：
$ 0.58万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ラットを用いた黒質線条体系ドーパミン(DA)線維の限局した化学破壊の後、胎仔中脳細胞の移植を行い、その過程において、1)回転運動の測定、2)in vivo microdialysis法による、細胞外カテコルアミン(CA)とその代謝産物、またDAとの機能的関連が強く示唆されているgamma-アミノ酪酸(GABA)などのアミノ酸の定量、3)免疫組織化学法による化学破壊部位の確認と移植細胞の成着・分化の解折、などを行った。しかし、研究の一部は現在もなお進行中であり、未だ終了していない。実験にはウイスター系雄性ラットを用いた。1)麻酔下、脳定位的に6-ヒドロキシドパミン(6-OHDA)を一側の内側前脳束へ微量注入することにより、中脳CA細胞を化学破壊した6-OHDA動物を作製した。2)メタンフェタミン(3mg/kg i.p.)誘起回転運動を投与後60min観測し、6-OHDA動物のなかで7turns/min以上の基準を満たしたものを、破壊群とした。3)線条体におけるDAおよびDOPAC、HVA、5-HIAAなど代謝産物、GABAその他のアミノ酸をin vivo microdialysis法により無麻酔無拘束下で測定し、遊離DAと代謝産物、およびアミノ酸などの細胞外液量と行動との関係を対照群と比較検討した。なお、microdialysis法施行時には定常状態のほかメタンフェタミンや高濃度カリウムなどに対する反応も経時的に観察し、DAやアミノ酸の定量には高速液体クロマトグラフフィー(HPLC-ECD)を用いた。破壊側の線条体では、細胞外液中DADOPAC,HVAの有意な減少およびGABAの増加が認められた。また、メタンフェタミンや高濃度カリウムに対する反応も減少していた。4)破壊群のなかから破壊-移植群を選び、破壊側線条体に胎仔中脳DA細胞の移植を行った。破壊-移植群に対しても、前記と同様に行動・生化学的測定を行い、移植による代償および機能的亢進を調べ、破壊群や無処置群との比較を行った。移植によりメタンフェタミン回転運動の破壊からの回復(減少)が認められ、移植部線条体ではDA活性の回復が認められた。5)行動および生化学的解析後、チロシン水酸化酵素(TH)免疫組織化学法により、破壊群線条体のTH活性の消失、および線条体移植部のTH陽性細胞に確認を行った。

在这项研究中，我们在对大鼠黑质纹状体多巴胺 (DA) 纤维进行局部化学破坏后移植胎儿中脑细胞，并在此过程中 1) 测量旋转运动，2) 体内通过微透析对胞外儿茶酚胺 (CA) 及其代谢物以及氨基酸（如 γ-氨基丁酸 (GABA)）进行定量，这些氨基酸强烈表明与 DA 功能相关；3) 通过免疫组织化学进行化学破坏；并分析移植细胞的粘附和分化。然而，一些研究仍在进行中，尚未完成。实验中使用雄性 Wistar 大鼠。 1）在麻醉下，将6-羟基多巴胺（6-OHDA）立体定向注射到内侧前脑束的一侧，以产生6-OHDA动物，其中中脑CA细胞被化学破坏。 2)给药后观察甲基苯丙胺(3 mg/kg i.p.)诱导的旋转运动60分钟，将符合7转/分钟或以上标准的6-OHDA动物分类为破坏组。 3）在无麻醉、无约束的情况下，采用体内微透析法测定纹状体中的DA和代谢物如DOPAC、HVA、5-HIAA，以及GABA等氨基酸，并比较体液量与行为的关系。对照组。此外，在微透析方法过程中，除了稳态之外，还观察到随时间推移对甲基苯丙胺和高浓度钾的反应，并使用高效液相色谱（HPLC-ECD）对DA和氨基酸进行定量。在受损侧纹状体中，观察到细胞外液中 DADOPAC 和 HVA 显着减少，GABA 增加。他们对甲基苯丙胺和高浓度钾的反应也减弱。 4)从破坏组中选出破坏-移植组，将胎儿中脑DA细胞移植到破坏侧纹状体中。还以与上述相同的方式对破坏-移植组进行行为和生化测量，以检查移植引起的代偿和功能增强，并与破坏组和未治疗组进行比较。移植后，观察到甲基苯丙胺旋转运动的恢复（减少），并且在移植的纹状体中观察到DA活性的恢复。 5)行为生化分析后，采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化证实破坏组纹状体TH活性消失，纹状体移植区存在TH阳性细胞。