YAC-TgMを用いたエンハンサーとプロモーター相互作用における距離感受性の解析

使用 YAC-TgM 分析增强子-启动子相互作用的距离敏感性

基本信息

批准号：
16688010
负责人：
谷本啓司
金额：
$ 15.89万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

平成17年度までに、マウスに導入したヒト・βグロビン遺伝子座(HS1/λ)において、LCRエンハンサーとεグロビン遺伝子間の距離(本来は5.6kb)をλDNA(約2.3kb)の挿入により大きくすることで、その転写が10%以下に低下することを示した。平成18年度は、(1)この表現型が、λDNA断片の挿入によりε遺伝子特異的なエンハンサーを破壊したことによるのではないことを証明し、また、(2)ε遺伝子がエンハンサーとの距離に対して感受性を持つ分子メカニズムを解明する、ことを研究の目的とした。上記の目的を達成するために、(1)LCRとε遺伝子間の、前回とは異なる位置にλDNAを挿入してトランスジエニック・マウスを作製(ε/λ)した。同マウスにおいてもε遺伝子発現の著しい低下が認められたことから、εグロビン遺伝子のLCRエンハンサーに対する距離感受性がさらに確かなものとなった。(2)次に、LCRに対する距離感受性を(少なくともdefinitive stageにおいては)持たないβ遺伝子プロモーターの配列を模倣し、変異型εプロモーター(Bepsi)を作製した。同変異と"HS1/λ"とを組み合わせてトランスジェニック・マウスを作製(HS1/λ/Bepsi)し、同遺伝子の発現解析を行った。その結果、BepsiプロモーターはLCRに対する距離感受性を持たないことがわかった。さらに、同トランスジェニック・マウスの内在の転写因子(EKLF)を破壊したところ、Bepsiプロモーターといえども、距離感受性となることがわかった。以上の結果から、本来エンハンサーの近位に存在するε遺伝子は距離感受性があり、遠位に存在するβ遺伝子は距離感受性がないこと。この違いは転写因子EKLFにより規定されることが明らかとなった。

到2005财年，通过插入λDNA（大约2.3kb），提高了引入小鼠的人β-格罗宾蛋白基因（HS1/λ）中的LCR增强子和εGrobin基因（最初为5.6kb）。至10％或更少。在2006财年中，这证明了这种表达类型不是由于通过插入λDNA片段而破坏了ε基因的特异性增强子，（2）ε基因在距离增强子的距离处，另一方面。这项研究的是阐明敏感的分子机制。为了实现上述目的，（1）通过将λDNA插入LCR和ε基因之间的不同位置来创建透射小鼠（ε/λ）。在小鼠中，ε基因表达显着降低，因此ε浓基因基因对LCR增强子具有进一步的可靠性。（2）接下来，我们模仿了LCR（至少在确定阶段）没有（至少在确定阶段）的β-元素启动子的数组，并创建了一个突变的ε启动子（BEPSI）。通过将其与“ HS1/λ”相结合制备转基因小鼠（HS1/λ/Bepsi），并进行了同一基因的表达分析。结果，发现BEPSI启动子对LCR没有距离敏感性。此外，当转基因小鼠的内部转移因子（EKLF）被破坏时，发现即使是BePSI启动子也会具有距离灵敏度。基于上述结果，最初存在于近距离增强子中的ε基因是距离灵敏度，而远处存在的β基因不是距离灵敏度。据显示，这种差异是由转录因子EKLF处方的。