「分子ものさし」を用いた核内微環境の定量的解析手法の構築と細胞生物学への応用

“分子量尺”核微环境定量分析方法构建及其在细胞生物学中的应用

基本信息

批准号：
05F05456
负责人：
金城政孝
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 細胞核内微環境を知るため拡散運動の指標となる[分子ものさし]として長さの異なる四種類のタンデム型EGFPを構築し、分子ものさしの拡散運動解析から核質をユークロマチンとヘテロクロマチンに分けて核内微環境を解析した。生細胞内においてユークロマチンとヘテロクロマチンを区別するために一種類のタンデム型EGFPとともに赤色蛍光蛋白質mRFPでタグしたH2B (H2B-mRFP)を共発現させ解析を行った。ヘテロクロマチン構造をユークロマチン化させるTSA阻害剤を用い、TSA阻害前後で解析を行った結果分子ものさし分子の動態には顕著な差が認められなかった。これらの結果から核質においてある程度の大きさの蛋白質(長さ:30nm)はクロマチン構造の種類と関係なくほぼ自由に拡散していることが示唆された。2. 核内微環境の定量的な評価や蛋白質の拡散解析を確立した経験を基に様々な機能性蛋白質の生細胞内における拡散解析から蛋白質の機能や機序を理解するための情報を引き出せるようになった(論文発表参照)。今後も更なる蛋白質関連応用研究が期待される。

1. 为了了解细胞核内部的微环境，我们构建了四种不同长度的串联EGFP作为扩散运动指标的【分子量尺】，并从分子量尺的扩散运动分析，我们将核质分为常染色质和异染色质，分别进行核微环境分析。为了区分活细胞中的常染色质和异染色质，用红色荧光蛋白 mRFP (H2B-mRFP) 标记的 H2B 与一种串联 EGFP 共表达并进行分析。使用将异染色质转化为常染色质的 TSA 抑制剂，我们分析了 TSA 抑制前后的结果，发现分子测量棒的动力学没有显着差异。这些结果表明，无论染色质结构的类型如何，一定大小（长度：30 nm）的蛋白质在核质中几乎自由扩散。 2. 基于建立核微环境定量评估和蛋白质扩散分析的经验，可以从活细胞中各种功能蛋白质的扩散分析中提取了解蛋白质功能和机制的信息（参见论文介绍）。预计未来将进行进一步的蛋白质相关应用研究。

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Dynamics of yeast prion aggregates in single living cells

DOI：
10.1111/j.1365-2443.2006.01004.x
发表时间：
2006-09-01
期刊：
GENES TO CELLS
影响因子：
2.1
作者：
Kawai-Noma, Shigeko;Ayano, Satoru;Taguchi, Hideki
通讯作者：
Taguchi, Hideki

In vivo quantitative analysis of PKA subunit interaction and cAMP estimation using dual color fluorescence cross correlation spectroscopy

使用双色荧光互相关光谱对 PKA 亚基相互作用进行体内定量分析和 cAMP 估计

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Molecules and cells 26
影响因子：
0
作者：
Park H.;et. al.
通讯作者：
et. al.

Diffusion analysis of glucocorticoid receptor and antagonist effect in living cell nucleus

DOI：
10.1016/j.yexmp.2006.12.001
发表时间：
2007-04-01
期刊：
EXPERIMENTAL AND MOLECULAR PATHOLOGY
影响因子：
3.6
作者：
Mikuni, Shintaro;Pack, Changi;Kinjo, Masataka
通讯作者：
Kinjo, Masataka

Cytosolic chaperonin prevents polyglutamine toxicity with altering the aggregation state

DOI：
10.1038/ncb1478
发表时间：
2006-10-01
期刊：
NATURE CELL BIOLOGY
影响因子：
21.3
作者：
Kitamura, Akira;Kubota, Hiroshi;Nagata, Kazuhiro
通讯作者：
Nagata, Kazuhiro

Microenvironment and effect of energy depletion in the nucleus analyzed by mobility of multiple oligomeric EGFPs

DOI：
10.1529/biophysj.106.079467
发表时间：
2006-11-01
期刊：
BIOPHYSICAL JOURNAL
影响因子：
3.4
作者：
Pack, Changi;Saito, Kenta;Kinjo, Masataka
通讯作者：
Kinjo, Masataka

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通讯作者：
金城政孝

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通讯作者：
金城政孝

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Takashi Jin;Fumihiko Fujii;Hiroshi Sakata;Mamoru Tamura;Masataka Kinjo;G.Nishimura;A.Masuda;T.Takagi;A.Kamada;Z.Foldes-Papp;K.Saito;K.Watanabe;Y.Nomura;金城政孝;坂田啓司;齋藤健太
通讯作者：
齋藤健太

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DOI：
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作者：
Takashi Jin;Fumihiko Fujii;Hiroshi Sakata;Mamoru Tamura;Masataka Kinjo;G.Nishimura;A.Masuda;T.Takagi;A.Kamada;Z.Foldes-Papp;K.Saito;K.Watanabe;Y.Nomura;金城政孝;坂田啓司;齋藤健太;齋藤健太
通讯作者：
齋藤健太