細胞由来微粒子迅速測定のための蛍光と散乱光測定の融合

融合荧光和散射光测量，快速测量细胞衍生的微粒

• 批准号: 22K19886
• 负责人: 金城 政孝
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19886/
• 关键词: 蛍光測定; 光散乱測定; 相関関数; 微粒子; 蛍光微粒子; 散乱測定; 相関分光

細胞内の液-液相分離による分子集合体やタンパク質凝縮体、また細胞外に放出される細胞外小胞など、様々な形態や大きさを有する新規の構造体が細胞情報伝達や疾患など生体の重要な機能に関連することが認識されている。本研究では、そのような多彩な構造と幅広いサイズ分布を持つ分子集合体を一括して『細胞由来微粒子』として捉え、それらを対象とした散乱光による網羅的検出と蛍光による特異的検出を統合した新規定量的検出法の確立を目指している。生体分子を対象とした蛍光と散乱光測定を融合した同時計測方法はこれまでになく、シグナル強度だけを見ると、散乱強度は極端に強く、蛍光は微弱であり、単純に比較することは困難である。申請者等は溶液中の分子や微粒子の特徴の一つである「揺れ動く」性質に着目した。蛍光・散乱測定に共通する時系列シグナル変化を基礎とする「自己相関解析」と、さらに蛍光と散乱光シグナル間の「相互相関解析」の同時利用で蛍光と散乱測定の二つの情報の統合と高度利用法を目指している。具体的測定手段は申請者等が構築した不等分割光ファイバー型蛍光相関分光装置の散乱同時測定への展開と高度化である。本研究では特に細胞外微粒子の中でもガン診断の指標等として注目されている抗原提示エクソソームの定量的検出・同定法の確立を通してその性能を実証し、新規細胞由来微粒子検出法としての可能性を実証する不当分割光ファイバーを利用した2色蛍光相互相関分光装置（FCrossCS）は、通常の励起光ダイクロイックミラー（第１次DM）を必要としないことから、これまで測定毎に必要とされた光軸・ピンホール調整等のキャリブレーションは一切不要となり、小型で長期安定な蛍光測定装置として利用でき、光軸調整不要なことから広い拡張性を有する。その拡張性の一つに、検出側の蛍光分光ダイクロイックミラー（２次）をハーフミラーに交換することで蛍光と散乱の同時測定を行なった。

细胞液体分子聚集体，蛋白质冷凝的身体和释放的细胞外核心是细胞的新结构，例如细胞信息传播和疾病。在这项研究中，具有多种结构和宽尺寸分布的分子收集被认为是“细胞衍生的细颗粒”，并整合了对散射光和荧光检测的全面检测。方法。有一个时钟测量值结合了生物分子的荧光和散射光测量，并且仅查看信号强度，散射强度非常强，荧光很弱，因此很难简单地比较。申请人专注于“摇动”特性，这是溶液中分子和细颗粒的特征之一。两个信息的整合：基于荧光和散射测量的时间序列信号的“自我相关分析”，以及荧光灯和散射光信号之间的“相互关节关系分析”。特定的测量方法是申请人在荧光相关装置散射上建造的不倾向光纤荧光相关装置的开发和进步。在这项研究中，我们通过定量检测和鉴定抗原表现外泌体的表现，这吸引了作为癌症诊断的指标，尤其是在非细胞细颗粒中。使用不公平的拆分光纤的荧光镜（FCROSSC）不需要正常的激发型染色镜（第一个DM），每次测量所需的光轴都可以用作小针孔的校准。 - 期限稳定的荧光测量设备，并且具有广泛的可扩展性，因为它不需要光轴调节。通过用半镜在检测到的侧代替荧光光谱仪（次级），同时进行荧光和散射，以同时进行荧光和散射。

项目成果

Pol-FCS回転拡散測定による抗原抗体反応検出

通过 Pol-FCS 旋转扩散测量检测抗原抗体反应

• 发表时间: 2022
• 作者: Rintaro Kawamura ;Soya Uetsuki ;Takehito Tanzawa ;Takayuki Kato ;Masataka Kinjo;金城政孝
• 通讯作者: 金城政孝