内耳聴覚系の音刺激入力開始期における発達メカニズムの解析

声音刺激输入发作期内耳听觉系统发育机制分析

基本信息

批准号：
16791034
负责人：
神谷和作
金额：
$ 2.3万
依托单位：
独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は以前に行ったmRNA DD法にてPhosphatidylinositol-5kinase-1alpba(Pip5k1a)を聴覚の生後発達に関わる遺伝子として同定し、ホスファチジルイノシトール経路の聴覚発達おける重要性を示唆した。これに関連し、共同研究者である東京都臨床医学総合研究所、金保安則部長グループが新規に作成したPip5k1a遺伝子欠損マウスの供与を受け、聴覚機能および内耳構造に関する検索を行った。遺伝子タイピングはneo遺伝子およびターゲット遺伝子のPCRにより行い、これらの聴力レベルをABRにより評価し、Surface preparation法により有毛細胞の配列および感覚毛の形態を評価した。同マウスヘテロ接合体(+/-)の雌雄より交配を開始した。これらは遺伝的に聴覚障害を持つ129SvJ、C57BL/6をバックグラウンド系統に持っているため、正常聴力を持つなC3H/He系への戻し交配を行った。初代の-/-は、聴性脳幹反応(ABR)閾値において+/+との大きな差は見られなかった。しかし、二代目の-/-の約半数に40kHzの高音域のみで30db以上の聴力低下が見られるマウスが出現した。8kHzおよび20kHzでは正常なABR閾値を示した。高音域のみに障害を持つこれらの難聴マウスは内有毛細胞および外有毛細胞にしばしば異常配列が見られる傾向があった。この難聴マウス同士の交配ではほぼ全ての個体にて難聴の表現型が見られ、遺伝的原因による難聴である可能性が高い。これらの形質は全ての-/-に現れるわけではないため他の遺伝子の変異が関与している可能性も考えられる。現在、聴力レベルによりマウスを選別し、系統化している。C3H/He系への戻し交配は3代目まで得られ、現在4代目を作成している。今後外有毛細胞を中心とした機能解析および組織学的解析をより詳細に行う予定である。

我们确定磷脂酰肌醇-5kinase-1AlPBA（PIP5K1A）是参与听力产后发展的基因，这表明通过先前执行的mRNA DD方法，磷脂酰肌醇途径在听觉开发中的重要性。在这方面，我们收到了我们的合作者，东京临床医学研究所（Kim Security Laugh）的一组董事，并寻找听力功能和内耳结构。通过NEO基因和靶基因的PCR进行遗传分类，并通过ABR评估听力水平，并通过表面制备评估了毛细胞序列和感觉头发形态。交配是从同一小鼠杂合子（+/-）的男性和女性开始的。这些在背景线上具有遗传性聋哑129SVJ，C57BL/6，因此它们被回到没有听力能力的C3H/HE线上。原始 - / - 在听觉脑干响应（ABR）阈值中 +/ +之间没有显着差异。但是，仅在40kHz的高范围内，第二代大约一半的人出现了，听力损失超过30dB。正常的ABR阈值显示为8kHz和20kHz。这些仅在高频范围内遭受的听力损失小鼠通常会在内部和外毛细胞中表现出异常的序列。在这种听力损失小鼠的交配中，几乎所有个体都表现出听力损失表型，并且听力损失很可能是由遗传原因引起的。由于这些特征并非全部出现 - / - ，因此可能涉及其他基因中的突变。目前，根据其听力水平选择并系统化小鼠。回到C3H/HE菌株已经获得了第三代，目前正在创建第四代。将来，将更详细地进行针对外毛细胞的功能和组织学分析。