モノクロトール抗体,遺伝子を用いた耐性癌の基礎的な診断と治療にする研究

利用野百合醇抗体和基因进行耐药性癌症的基础诊断和治疗研究

• 批准号: 04151030
• 负责人: 白川 茂
• 金额: $ 10.88万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04151030/
• 关键词: 多剤耐性(MDR)腫瘍; P糖蛋白(P-glycoprotain;P-gp); 抗P-gp抗体(MRK16,C219,U1C); 多剤耐性遺伝子(MDR1); MDR1mRNA発現; ヒト・マウスキメラ抗体; 免疫磁気ビーズ(MACS)法; rhodamino123effluxtest

(1)MRK-16によるP糖蛋白(P-gp)検出感度増強に免疫磁気ビーズ(MACS)法を用い,これとFACS法の組み合せで,臨床試料の耐性度診断に有用と考えられた(鶴尾)。(2)レーザー顕微鏡を用い,P-gpにより細胞内外の薬剤移動が規定された蛍光物質(adriamycin,rhadamine)と細胞を孵置し,細胞内蛍光強度や分布から多剤耐性(MDR)細胞の検出を試み,CyA誘導体PSC833の添加にて判定がより容易になった(下山)。(3)固型腫瘍のMDR1遺伝子/P-gp発現をRT-PCRと免疫染色で検討し,P-gp同定には後者が有用であるが感度が劣り,抗P-gp抗体の種類(C219,MRK16)で感度,細胞内局在に差があり,gliomoではMDR1遺伝子発現,P-gp産生は毛細血管に限局していた(玉置)。(4)正常及び悪性リンパ腫のリンパ筋につき抗P-gp抗体U1C2による免疫染色とRT-PCRによるMDR1mRNAの検討を行い,P-gp及びMDR1遺伝子発現はいずれのリンパ組識にも認められたが,P-gp陽性細胞はT-201ehistiocyteで腫瘍細胞ではなかった(白川)。(5)初診時急性白血病細胞(AML50例,ALL25例)につきP-gp/MDR1発現をRT-PCRを中心に検索し,免疫表現型と対比した。MDR1mRNAの発現はM1に高く,CD34(+)AML,CD7(+)AMLで有意に高く,幹細胞白血病に近縁なCD7(+)SCD3(-)CDU(-)CD8(-)ALLは8例中6例(75%)に発現され,予後不良であった(白川)。(6)3種類のamplimerを用いたRT-PCRでMDR1発現を検索し,いずれのamplimerでもMDR化したAML,ALL,CML-BCで33〜67%陽性,乳癌,卵巣癌とも原発巣より転移巣系で高値であった(向山)。また未分化甲状腺癌は予後最悪で,細胞株8株全例P-gp/MDR1の発現がみられた(菅原)。(7)P-gp抗体(MRK16,MRK17)を介したADCCの誘導に,NK細胞はMRK16のみ,単球は両抗体を介して如き,ヒト・マウスキメラ抗体はNK細胞をeffectorとしたADCC反応を増強させた。M-CSF遺伝子をMDR卵巣癌細胞に移入し,種々のM-CSF産生株を得,治療実験への応用を考えている(曽根,鶴尾)。(8)MDR克服にPSC833が有望であり(下山),MDR1発現の高いCD7(+)AMLでrhadamineeffluxtestが検討された(白川)。

(1)采用免疫磁珠(MACS)法增强MRK-16对P-糖蛋白(P-gp)的检测灵敏度，与FACS法联合被认为有助于诊断临床耐药程度样品（鹤尾）。 (2)利用激光显微镜，将细胞与受P-gp调节细胞内外药物运动的荧光物质（阿霉素、拉丹明）一起孵育，根据细胞内荧光强度和分布判断多药耐药（MDR）细胞。尝试检测，添加 CyA 衍生物 PSC833 使测定更容易（Shimoyama）。 (3)使用RT-PCR和免疫染色检查实体瘤中MDR1基因/P-gp的表达虽然后者对于P-gp鉴定有用，但其敏感性较低，并且与抗P-gp抗体的类型(C219， MRK16) 显示出敏感性和亚细胞定位的差异，并且在神经胶质细胞中，MDR1 基因表达和 P-gp 产生定位于毛细血管 (Tamaki)。 (4)对正常和恶性淋巴瘤的淋巴肌进行抗P-gp抗体U1C2免疫染色和RT-PCR检测MDR1 mRNA，观察两种淋巴组织中P-gp和MDR1基因的表达。 gp阳性细胞是T-201组织细胞，不是肿瘤细胞(Shirakawa)。 (5)初诊时主要通过RT-PCR检测急性白血病细胞(50例AML、25例ALL)中P-gp/MDR1的表达，并与免疫表型进行比较。 MDR1 mRNA在M1中表达较高，在CD34(+)AML和CD7(+)AML中表达明显升高，其中CD7(+)SCD3(-)CDU(-)CD8(-)ALL 8例，密切相关。与干细胞白血病有关，6例（75%）有表达，预后较差（Shirakawa）。 (6)使用三种类型的扩增子通过RT-PCR检测MDR1表达，所有扩增子在33-67%的MDR诱导的AML、ALL和CML-BC中均呈阳性，且乳腺癌和卵巢癌均来自于MDR诱导的AML、ALL和CML-BC。原发肿瘤在巢系统（Mukaiyama）中价值较高。此外，未分化甲状腺癌的预后最差，所有八种细胞系均表达 P-gp/MDR1 (Sukawara)。 (7)通过P-gp抗体(MRK16、MRK17)诱导ADCC，NK细胞仅使用MRK16，单核细胞使用两种抗体，并且人-小鼠嵌合抗体使用NK细胞作为效应器诱导ADCC反应得到加强。我们已经将M-CSF基因转移到MDR卵巢癌细胞中，获得了多种产生M-CSF的菌株，并正在考虑将它们应用于治疗实验（Sone，Tsuruo）。 (8) PSC833有望克服MDR(Shimoyama)，并且在MDR1高表达的CD7(+) AML中研究了罗丹明外流试验(Shirakawa)。

项目成果

Nakase K,et al: "Diagnostic and climical importance of interleubin-2 veceptor algha chain expression on non-T-coll acute loukemda cells." Br J Idaemaeol. 80. 317-326 (1992)

Nakase K 等人：“非 T-coll 急性 loukemda 细胞上白细胞介素 2 载体藻链表达的诊断和临床重要性。”

Sygawara I,et al: "Proparation and charactnization of a murine mono-clonal antibody (MDR3M) reactive with maru gene product." Jpn J Cancer Res. 83. 795-797 (1992)

Sygarara I 等人：“与 maru 基因产物反应的鼠单克隆抗体 (MDR3M) 的制备和表征。”

Adachi M,et al: "Protain-tyrosine phosphatase expression in pre-B cell NALM-6" Cancer Res. 52. 737-740 (1992)

Adachi M 等人：“前 B 细胞 NALM-6 中的蛋白质酪氨酸磷酸酶表达”Cancer Res。

Nishikawa M,ed al: "The expression and possible rolos of protein C in haematopoiatic cells." Leukemin and Lymphome. 8. 201-211 (1992)

Nishikawa M,ed al：“C 蛋白在造血细胞中的表达和可能的作用。”

Suzuki H,et al: "p53 mutctions in non-small cell lnng cancer in Japan:Association between mutations and smoking" Cancer Res. 52. 734-736 (1992)

Suzuki H 等人：“日本非小细胞肺癌中的 p53 突变：突变与吸烟之间的关联”Cancer Res。