組織特異的幹細胞の分化・増殖に関与する諸因子の検討と肝幹細胞移植の実験的研究

组织特异性干细胞分化、增殖相关因素的检测及肝干细胞移植的实验研究

• 批准号: 14770241
• 负责人: 足立 雅之
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770241/
• 关键词: 肝再生; 肝細胞培養法; Side population cell; アポトーシス; コラーゲンサンドウィッチ法; SP細胞

肝細胞長期培養系またはSP細胞を用いた肝細胞分化・増殖に関与する諸因子の動態についての検討通常の培養条件で、初代培養肝細胞は短期間で線維芽細胞様に形態変化し肝特異的機能を失うが、コラーゲンゲルを重層することで、いったん失った機能を再獲得できることを、肝特異的遺伝子発現量やアルブミン産生量の比較で明らかにした。臓器によらない分離方法で採取する組織幹細胞として注目されているSide population cell(SP細胞)は、骨髄・肝臓非実質細胞・脾臓のいずれから分離したものでも、分離直後は肝特異的遺伝子の発現は認められないが、初代培養肝細胞と2週間混合培養することで増殖、アルブミン・CK18・AFPといった肝特異的マーカーの発現を蛋白質のレベルで確認できるようになる。この結果から、コラーゲンゲル・サンドイッチ法を用いた初代培養肝細胞との混合培養系が、SP細胞を肝細胞に分化誘導させる環境を構築できることが示唆された。肝再生におけるアポトーシス制御遺伝子の発現の検討アポトーシス制御する因子が肝細胞分化・増殖に重要であり、肝細胞内に生じる酸化ストレスが長期間にわたる機能維持、あるいは再生過程に対して阻害的に作用することを予想している。酸化ストレスによるアポトーシス誘導過程に対して、アポトーシス促進型Bcl-2family遺伝子Baxが重要であることが確認された。さらに、この過程に介在すると思われる各種シグナル伝達系あるいは転写因子の役割を検討したところ、MAP kinase assayのひとつc-Jun N-terminal Kinase(JNK)が酸化ストレスによるアポトーシスに促進的に働き、転写因子NF-kappa Bがアポトーシス抑制的に働くことを確認した。

检查使用长期肝细胞培养系统或SP细胞参与肝细胞分化和增殖的因素的动力学检查。原发性培养的肝细胞会在短时间内发生类似成纤维细胞的形式的成纤维细胞样形式的变化，但是通过分层胶原蛋白凝胶，我们透露，一旦可以重新重新重新获得功能，我们就比较了肝脏特异性基因表达水平和白蛋白的产生量。 Side population cells (SP cells), which are attracting attention as tissue stem cells collected using organ-independent separation methods, are separated from either bone marrow, non-parenchymal cells or spleen, and liver specific genes are not expressed immediately after separation, but by mixing with primary hepatocytes for two weeks, the cell proliferates and the expression of liver specific markers such as albumin, CK18, and AFP can be confirmed at蛋白质水平。这些结果表明，使用胶原蛋白凝胶三明治方法具有一级培养的肝细胞的混合培养系统可以创建一个将SP细胞诱导到肝细胞中的环境。检查调节凋亡的肝脏再生因子中细胞凋亡调节基因的表达对肝细胞分化和增殖很重要，我们预计肝细胞内产生的氧化应激将在长时间或重新生产过程中长期维持功能的抑制作用。已经证实，促凋亡的Bcl-2family基因BAX对于诱导由氧化应激引起的细胞凋亡的过程很重要。此外，当我们研究似乎在此过程中介导的各种信号转导系统和转录因子的作用时，我们确认C-Jun N末端激酶（JNK）（JNK）（MAP激酶分析）之一促进了氧化应激引起的凋亡，并促进了转录因子NF-KAPPA B，ACTS ACTISS APOPSISS APOPSISS。

项目成果

Masayuki Adachi, et al.: "Lipid Peroxidation Product 4-hydroxy-nonenal Enhances Ethanol-Induced Hepatocellular Apoptosis by Affecting Both Pro-apoptotic JNK Activity and Anti-apoptotic NF-kB."Gastroenterology. 124. A715 (2003)

Masayuki Adachi 等人：“脂质过氧化产物 4-羟基壬烯醛通过影响促凋亡 JNK 活性和抗凋亡 NF-kB 来增强乙醇诱导的肝细胞凋亡。”胃肠病学。