モノクロナ-ル抗体,遺伝子を用いた耐性癌の基礎的な診断と治療に関する研究

利用单克隆抗体和基因进行耐药癌症基础诊断和治疗的研究

• 批准号: 03151028
• 负责人: 白川 茂
• 金额: $ 9.34万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03151028/
• 关键词: 多剤耐性腫瘍; P糖蛋白(Pーglycoprotein;Pーgp); 抗Pーgp抗体MRK16; 抗Pーgp抗体C219; 多剤耐性遺伝子(mdr1); mdr1mRNA発現; ヒトマウスキメラ抗体; magneticーaffinity cell sorring(MACS)法

(1)基礎的に抗P糖蛋白(Pーgp)抗体MRK16(鶴尾)の反応性とmdr1遺伝子のmRNA発現程度を培養細胞株で検討し,中等度以上のmRNA発現細胞株でMRK16陽性であった(下山)。(2)ヒト腫瘍nude mouse移植株47株のうち多剤耐性を示す33株中21株でRTーPCR法によりmdr1遺伝子の発現を認め,このうち8株が抗Pーgp抗体C219陽性であった。なおMRK16とC219による固型腫瘍材料の免疫染色至適条件が決定された(玉置)。(3)臨床材料につきmdr1遺伝子発現を6種類のamplimerを用いてRTーPCR法で検索し,amplimerは200〜300bp前後のものが感度が高く,少量の試料で解析可能であった(向山)。(4)白血病,悪性リンパ腫などの造血器腫瘍でのPーgpの関与はin vivoの耐性細胞株で確認された。in vivoの症例検索がなされ,128例の造血器腫瘍でMRK16 F(ab')_2抗体(鶴尾)を用いた間接法で11例陽性,直接法では3例(リンパ腫再発例)の化学療法不応例のみに陽性であった(上田)。また64例の各種白血病症例で同上抗体でのFACS解析陽性例は8例で,うち5例は単球性性格を示し,経過を追跡し得た治療抵抗性8例でmdr1遺伝子発現を経過中に認めたものはPh(+)ALL,MDS各1例で臨床上検出限界に問題が残った(白川)。(5)固型癌については,MRK16の肺癌培養細胞42株の検討では全例陰性であった(上田)が,C219の免疫染色で肺癌,転移性肺腫瘍76例中26例(24%)に陽性(広橋),大腸癌ではC219で高率(68%)に陽性(玉置),また大腸癌,未分化甲状腺癌,肝癌,胎盤など(菅原),乳癌,卵巣癌など(向山)でPTーPCR法によるmdr1mRNAの有意な発現があり,化学療法抵抗性と関連があった。(6)MRK16とMRK17はADCC誘導に際し,リンパ球はMRK16においてのみeffectorとして,単球は両抗体において働くことが判明した。またヒトマウスキメラ抗体の臨床応用への可能性が示唆された(曽根,鶴尾)。(7)MRK16とmagnetic particleをcouplingしたbeadsを用いるmagneticーaffinity cell sorting(MACS)法が開発され,Pーgp発現多剤耐性細胞の分離に成功した。

(1) 基本上，我们研究了培养细胞系中抗P-糖蛋白（P-gp）抗体MRK16（Tsuruo）的反应性和mdr1基因的mRNA表达程度，发现具有中度或更高mRNA的细胞系MRK16 表达呈阳性（下坡）。 (2)在47株人肿瘤裸鼠移植株中，33株中的21株经RT-PCR观察到mdr1基因表达，其中21株表现出多药耐药性，其中8株抗P-gp抗体C219呈阳性。 。用 MRK16 和 C219 对实体瘤材料进行免疫染色的最佳条件已经确定 (Tamaki)。 (3)使用6种扩增子通过RT-PCR寻找临床材料中的mdr1基因表达，发现200至300bp左右的扩增子具有高灵敏度，并且可以用少量样品进行分析(Mukaiyama)。 (4)在体内耐药细胞系中证实P-gp参与白血病、恶性淋巴瘤等造血系统肿瘤。进行体内病例检索，使用MRK16 F(ab')_2抗体(Tsuruo)间接法检测出128例造血系统肿瘤呈阳性，并使用直接法进行了化疗的3例(复发性淋巴瘤病例)只有无反应者呈阳性（上田）。此外，在64例不同类型的白血病病例中，使用相同抗体的FACS分析中有8例呈阳性，其中5例显示单核细胞特征，并且在8例可追踪治疗耐药的病例中，mdr1基因表达正在进展。 Ph(+)ALL和MDS各1例，临床检出限（白川）仍存在问题。 (5)关于实体癌，对42个培养的MRK16肺癌细胞系(上田)进行检查，所有病例均为阴性，但C219免疫染色显示76例转移性肺肿瘤中有26例(24%)为肺癌。 C219（广桥），高结直肠癌PT-PCR显示mdr1 mRNA在结肠癌、未分化甲状腺癌、肝癌、胎盘癌等（菅原）、乳腺癌、卵巢癌等（Mukaiyama）中也有显着表达，与化疗耐药相关。 (6)发现MRK16和MRK17仅在MRK16中充当效应子，单核细胞在诱导ADCC中充当效应子。此外，还提出了人-鼠嵌合抗体临床应用的可能性(Sone，Tsuruo)。 (7)开发了磁珠与MRK16和磁性颗粒偶联的磁亲和细胞分选(MACS)方法，成功分离了表达P-gp的多重耐药细胞。